【摘 要】
：
紫茎泽兰（Ageratina adenophora）是我国危害最严重的外来入侵植物之一。研究表明紫茎泽兰提取物具有多种生物学活性,其中紫茎泽兰中隐绿原酸（4-O-caffeoylquinic acid）的抗炎活性少有研究。本文从紫茎泽兰甲醇提取物的水相部分中分离出一种单体化合物,利用超高效液相色谱法进行纯度检测,并通过CCK-8法筛选合适的用药浓度后,最后采用硝酸还原法、ELISA法、RT-PCR
论文部分内容阅读
紫茎泽兰（Ageratina adenophora）是我国危害最严重的外来入侵植物之一。研究表明紫茎泽兰提取物具有多种生物学活性,其中紫茎泽兰中隐绿原酸（4-O-caffeoylquinic acid）的抗炎活性少有研究。本文从紫茎泽兰甲醇提取物的水相部分中分离出一种单体化合物,利用超高效液相色谱法进行纯度检测,并通过CCK-8法筛选合适的用药浓度后,最后采用硝酸还原法、ELISA法、RT-PCR法、Western Blot法探究其抗炎作用。研究结果如下:1.隐绿原酸的分离、鉴定及提取工艺优化利用超高效液相色谱检测紫茎泽兰中提取到的隐绿原酸纯度达到94.3%。紫茎泽兰中隐绿原酸的最佳提取工艺为:提取溶剂为90%乙醇,料液比1:4,浸泡时间4 h,浸泡3次,上样样品p H值为3,大孔树脂类型为NKAⅡ。2.隐绿原酸对RAW264.7细胞生长状态及细胞活力的影响利用细胞观察法和CCK-8法检测细胞毒性,结果显示:RAW264.7细胞在受到1.0μg/m LLPS刺激后,空白对照组细胞聚集生长表面光滑无伪足,LPS组试验组多有伪足不再聚集生长,数量有所减少,试验组除400μg/m L外与空白对照组相比无显著差异;400μg/m L细胞活力明显低于正常组,200-50μg/m L试验组和LPS组均对细胞活性无显著影响,由此选择隐绿原酸在200、100、50μg/m L时作为后续试验用药浓度。3.隐绿原酸对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子表达的影响利用硝酸还原法法检测200μg/m L、100μg/m L、50μg/m L的隐绿原酸作用后的RAW264.7细胞的NO分泌量,结果表示:100μg/m L的隐绿原酸对LPS刺激RAW264.7的抑制NO分泌量效果最显著;利用ELISA法测定200μg/m L、100μg/m L、50μg/m L隐绿原酸对细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10炎症因子分泌量,结果显示:200μg/m L、100μg/m L、50μg/m L的隐绿原酸对TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等促炎细胞因子均有不同程度的抑制作用,而对抑炎细胞因子IL-10均有显著的促进作用（P＜0.01）,说明隐绿原酸通过下调促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、COX-2,上调抗炎因子IL-10来发挥抗炎效应,抗炎效果最显著为100μg/m L组。4.隐绿原酸对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子及MAPKs通路相关基因m RNA表达的影响RT-PCR结果显示:隐绿原酸作用后,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10的变化趋势整体与ELISA相符合;LPS诱导RAW264.7能使MAPKs通路中相关基因P38、JNK、ERK1/2 m RNA合成升高从而激活MAPKs信号通路,隐绿原酸作用后能明显下调RAW264.7细胞中p38、JNK、ERK1/2基因m RNA的表达,隐绿原酸能从转录水平上抑制MAPKs通路的激活。以上结果表明:隐绿原酸可通过抑制MAPKs通路中基因的转录来抑制它们被激活,从而调控炎性因子的表达。5.隐绿原酸对MAPKs通路相关蛋白表达的影响Western Blot结果显示:隐绿原酸能抑制经LPS刺激后的RWA264.7细胞中p38、JNK1/2、ERK1/2蛋白表达,抑制JNK1/2、ERK1/2的磷酸化抑制MAPKs通路的激活,从而调控炎症因子的释放与表达。以上结果表明:隐绿原酸能从蛋白翻译水平上抑制RAW264.7细胞MAPKs通路的激活,并最终调控炎性因子的表达。综上所述,紫茎泽兰甲醇提取物的水相部分中能得到纯度为94.3%的隐绿原酸,作用在LPS诱导后的RAW264.7细胞时,隐绿原酸可通过抑制MAPKs通路相关基因的转录和MAPKs通路蛋白的翻译来抑制MAPKs通路的激活,最终调节细胞中的促炎因子和抗炎因子的释放和表达来发挥抗炎作用。
其他文献
白三叶（Trifolium repens）是豆科三叶草属的一种优良多年生草种,因其具有高产量、优良的牧草品质、强大的生物固氮能力等特点,成为全世界各大区域大量栽培种植的豆科牧草,亦被应用于观赏性草坪。然而,白三叶喜冷凉湿润气候,并且抗旱弱、耐热性较差,故高温、干旱成为限制其生产利用的主要逆境胁迫因子。外源添加是一种操作简便、见效迅速的提高植物抗逆性的方法。壳聚糖（Chitosan,CTS）是一种无
若尔盖高原地处青藏高原东缘,是我国的重要牧区,对长江及黄河流域水源涵养与生物多样性保护有着极为重要的战略意义,具有重要的生态系统服务功能。近几十年来,受到全球气候变化,以及过度放牧和人工排水等影响,若尔盖高原湿地面积日趋萎缩,草地退化日趋严重,出现大面积沙化草地。在近年的退牧还草和湿地保护工程实施后,草地的沙化趋势得到遏制,部分沙化草地得到恢复。本研究以若尔盖高寒沙化草地为研究对象,通过建立沙化草
青藏高原东缘的若尔盖高原拥有面积广阔的天然草地,也是黄河与长江的水源地之一,其生态功能十分重要。然而近年来,由于全球气候变暖,人为过度放牧以及风沙沉积等原因,若尔盖高原分布的天然草地出现了大面积的沙化现象。自1987年至2002年间,仅红原县的沙化土地面积就扩大了138.26km~2。草地沙化严重影响了当地畜牧业的发展,更破坏了重要的草地生态系统功能,草地沙化问题已不容忽视。近年来,学者专家们对于
匍匐翦股颖（Agrostis stolonifera）为禾本科翦股颖属多年生草本植物,是一种优良的冷季型草坪草,具有绿期长、匍匐性强、质地细腻和耐低修剪等特点,广泛应用于园林绿化和高尔夫球场草坪等领域。但匍匐翦股颖耐热性较差,夏季高温导致草坪质量下降的问题突出。本试验以广泛应用的‘penncross’匍匐翦股颖为研究对象,2017年5月28日到8月7日和2018年6月9日到9月8日期间,在已成坪的
在“互联网+”的背景下，互联网等信息技术与教育不断融合造就了在线教育。但在线教育主要集中于K12领域，近期“双减”政策的出台使传统的中小学在线教育进入寒冬，但职业在线教育却迎来了全新发展空间，如以财经领域为主要业务的高顿教育。文章主要以高顿教育为主，基于PEST分析与SWOT分析其现状与营销环境，基于4P理论分析其营销策略，探究高顿如何在在线教育中有进一步的发展。
(目的)中草药作为常见的免疫增强剂,能够提高机体免疫能力和抗病能力,可用于水产养殖疾病防治药物和饲料添加剂,其开发、研制与应用也受到越来越多学者的关注。玛卡作为中草药的一种,具有提高生育能力、抗疲劳、抗氧化、增强免疫力、迅速恢复体力等多种功效。为探究玛卡作为饲料添加剂和免疫增强剂在水产养殖上的潜在应用和价值。（方法）本试验以草鱼为研究对象,通过饲喂含有不同水平玛卡（0,0.2,1.0,5.0,10
【目的】帕金森疾病（Parkinson,PD）是对全球中老年人危害极大的神经退行性疾病,仅次于老年痴呆病,PD理想动物模型应表现出运动功能障碍和多巴胺能变性病理学,但是已知模型并未完全满足其特征。PD病人大脑黑质铁含量明显增加,脑内铁参与Fenton反应导致氧化应激与PD发病机制密切相关,因此本实验利用柠檬酸铁连续干预C57BL/6小鼠16周,从小鼠行为学、组织铁含量、病理变化及氧化应激着手,探究
亚临床坏死性肠炎（SNE）广泛存在于肉鸡中,通过降低生长性能来引起严重的经济和社会问题。本研究基于约氏乳杆菌BS15的分子调控机制,以及其对SNE感染肉鸡的肝脏炎症通路的影响,探讨SNE对肝脏炎症的分子机制,并研究约氏乳杆菌BS15对SNE的预防作用。将180只（Cobb 500）肉鸡分成3组,提供饮食如下:第1组作为正常对照（NC）饲喂基础日粮,第2组作为SNE对照（SNE实验模型）饲喂基础日粮
本论文以肉鸡为研究对象,旨在研究日粮中添加约氏乳杆菌BS15对亚临床坏死性肠炎（SNE）肉鸡脂质代谢和肠道菌群的影响。试验选用1日龄科宝500雄性健雏180只,随机平均分为3组:空白对照组（NC组）,造模组（SNE组）,约氏乳杆菌BS15预防组（BS15组）。肉鸡共饲养28天。BS15组饲喂添加活菌数为1.0×10~9 cfu/m L的约氏乳杆菌BS15全菌液拌料。15日龄时,SNE组和BS15组
临床型乳房炎严重影响和制约了奶牛养殖业的健康发展。目前国内外防治该病主要以抗生素为主,不仅会导致乳汁抗生素残留、疗效下降、抗生素用量升高和耐药菌株产生等问题,还严重影响人们的身体健康,极易引起乳品安全公共事件。而白头翁及其提取物白头翁皂苷同时具备抗炎、抑菌、抗氧化和提升免疫等药效,与乳房炎清除细菌、缓解炎症、提高自身免疫力以帮助自愈的治疗需求密切相关。因此,探究白头翁皂苷对奶牛乳房炎的疗效及其作用