紫甘蓝花色苷分离、鉴定及性质研究

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紫甘蓝属十字花科、芸苔属甘蓝种的一个变种,其富含花色苷,且在我国有较大面积的栽培和种植,因此成为天然色素提取的重要原料。本文以紫甘蓝为实验材料,通过水酶法提取紫甘蓝中的花色苷色素,主要研究了紫甘蓝色素液的澄清工艺、稳定性和抗氧化性,并分离、鉴定了紫甘蓝花色苷的各个组分,旨在为紫甘蓝花色苷的应用提供理论依据。首先,研究了紫甘蓝预处理及酶法澄清工艺对紫甘蓝色素液澄清度的影响,并通过响应面实验优化了工艺参数。结果表明,粉碎预处理以及果胶酶浓度、酶解温度和酶解pH对紫甘蓝色素液的澄清度影响较大,优化后的最佳工艺参数为:果胶酶浓度0.0013mL/100g、酶解温度55.6℃、pH4.1、酶解时间50min,在此条件下,紫甘蓝色素液透光率可达99.2%,且色价提高了33.6%。其次,为了分离、鉴定紫甘蓝中的花色苷,研究了Sephadex LH-20凝胶柱层析的分离条件,在最佳条件下收集、合并各组分,通过紫外-可见扫描、薄层层析和高效液相色谱方法进行了初步鉴定。结果表明:洗脱液为30%乙醇、流速1mL/min、上样量100mg,LH-20凝胶柱对紫甘蓝色素分离效果最好,分为四个组分;经紫外-可见扫描鉴定组分Ⅰ为非花色苷,组分Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为花色苷类;薄层层析发现LH-20凝胶层析所得的各个组分仍然是混合物,其中组分Ⅱ、Ⅲ分离出两组花色苷,组分Ⅳ分离出三组花色苷;在此实验的洗脱梯度下,HPLC实验从未经过凝胶分离的样品中分离出8种花色苷,其中峰7(40.51%)、峰8(19.61%)、峰5(14.12%)是紫甘蓝花色苷的主要成分,组分Ⅱ、Ⅳ分离出7种花色苷,组分Ⅲ分离出5种花色苷。第三,以树脂初步纯化后的紫甘蓝色素粉末为材料,研究了pH、温度、抗坏血酸、金属离子以及糖类等因素对紫甘蓝花色苷稳定性的影响。结果表明,pH对紫甘蓝花色苷稳定性影响较大,花色苷含量随pH增大而下降,且当pH>7,花色苷稳定性呈极显著降低趋势;紫甘蓝花色苷的热稳定较好,但温度>80℃,紫甘蓝花色苷稳定性较差;高浓度抗坏血酸影响紫甘蓝花色苷的稳定性;金属离子的影响存在差异,Na+、K+、Mg2+对花色苷稳定性无显著性影响,Ca2+对其稳定性影响显著,而Zn2+、Al3+的影响达到极显著程度;蔗糖对紫甘蓝花色苷表现为辅色作用,葡萄糖、乳糖、果糖等糖类对紫甘蓝花色苷的稳定性影响较小;柠檬酸和酒石酸对紫甘蓝花色苷都有明显的增色作用;苯甲酸钠和山梨酸钾对紫甘蓝花色苷稳定性无显著性影响。最后,以树脂初步纯化后的紫甘蓝色素粉末为材料,采用六种不同的抗氧化体系研究了紫甘蓝花色苷的体外抗氧化能力,结果表明,紫甘蓝花色苷具有良好的体外抗氧化能力,其总还原力随着浓度的增加而增大,并且两者之间的量效关系存在显著的正相关性;自由基清除能力发现,其对0-2·、·OH、DPPH·、ABTS·+等清除能力随着浓度的增加而增大,两者之间存在明显的量效关系;研究还发现,普鲁士蓝法测定的还原力与FRAP法测定的抗氧化能力之间存在显著相关性。
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