论文部分内容阅读
目的：建立测定大鼠血浆中姜黄素衍生物B6浓度的高效液相色谱分析方法;以高效液相色谱法研究姜黄素衍生物B6在大鼠体内的药代动力学;采用灌胃的给药方式来研究姜黄素衍生物B6对高脂饲料喂养大鼠的调血脂、脂肪肝保护作用。 方法： ①建立HPLC检测方法:高效液相色谱仪为Agilent1100系列;色谱柱选用ZORBAX SB-C18(4.6×150 mm，5μm);以乙腈-H2O=82∶18(V/V)为流动相;以姜黄素衍生物C65为内标，血浆经正己烷萃取后，氮气吹干，用乙腈∶水(82∶18V/V)复溶;流速1 mL·min-1;柱温45℃;检测波长324nm，参比波长:380 nm;对血浆中的姜黄素衍生物B6进行检测。 ②药动学实验:24只♂SD大鼠随机分成3组，每组8只，分别以静脉注射(iv)、腹腔注射(ip)和灌胃(ig)3种方式给药，用建立的HPLC方法，测定大鼠血浆中姜黄素衍生物B6的浓度。iv、ip和ig后血浆药物浓度的数据经DAS2.0程序处理，用非房室模型估算药动学数据。以AUC(0-∞)计算生物利用度。 ③降血脂、脂肪肝保护作用实验:将60只♂SD大鼠随机分成基础饲料组、高脂饲料组、B6高剂量组、B6低剂量组、姜黄素组，每组各12只。B6高剂量组、B6低剂量组、姜黄素组给予高脂饲料，B6高剂量组按4 mg·kg-1·d-1 ig，B6低剂量组按2 mg·kg-1·d-1 ig，姜黄素组按100 mg·kg-1·d-1 ig;各组均自由饮食，每周测体重一次，连续8周后处死，取肝脏称重，做病理切片，采血进行血脂检测。 ④急性毒性试验:6只ICR小鼠，每只ig B63g/kg，给药后自由饮食，连续观察3天。 结果： ①方法学结果:B6和内标C65出峰干净利落，峰形良好，分离完全，无杂质峰干扰， B6保留时间4.9 min，C65保留时间为4.3 min。B6在0.01-2.5μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999);最低检测限为0.010μg·mL-1，平均相对回收率(104.95±3.09)％;平均绝对回收率为（76.94±1.57）％;日内精密度RSD小于5％，日间精密度RSD小于15％，可用于B6药动学检测。 ②药动学结果:大鼠B6 iv(10 mg·kg-1)、ip(20 mg·kg-1)和ig(20 mg·kg-1)给药后的Cmax分别为(1.566±0.331)mg·L-1、(0.1400±0.017)mg·L-1、(0.069±0.011)mg·L-1，Tmax分别为3 min，15 min，30 min; t1/2z分别为(170.291±57.273) min,(134.873±39.375) min,(143.535±48.375) min;AUC(0-t)分别为(44.578±4.342) mg·min·L-1,(9.479±1.058) mg·min·L-1,(7.334±1.901)mg·min·L-1; AUC(0-∞)分别为(50.312±6.415) mg·min·L-1,(11.079±1.144) mg·min·L-1，(8.899±2.247) mg·min·L-1; B6在大鼠体内的ig生物利用度F=(8.884±0.879)％。ip生物利用度F=(11.103±0.962)％。 ③肝脏病理切片结果基础饲料组、B6高剂量组、B6低剂量组和姜黄素组肝小叶结构完整，肝细胞索排列整齐，肝细胞内偶见脂滴及水样变性。高脂饲料组形成以小泡为主的脂肪变伴水样变性，发生不同程度的肝小叶内炎症，肝细胞浊肿、气球样变、点或灶状坏死，并偶见不同程度纤维化。 ④血脂及体重结果高脂饲料组血浆中甘油三脂、总胆固醇、Apo-b含量明显高于其它各组。高脂饲料组肝重明显高于其它各组。基础饲料组体重增加明显小于其他各组，高脂饲料组、姜黄组、B6组则无明显差异。 ⑤急性毒性试验在观察期间无1只小鼠死亡，所有观察指标均无异常。 结论： ①本研究建立的HPLC法具有快速、简便、灵敏、精密度高，可用于大鼠血浆中B6的检测。 ②B6大鼠体内ig、ip吸收较好，血浆半衰期较长。 ③B6 ig给药能有效防止大鼠高脂饮食引起的血脂升高及肝脂肪变性，效价相对于姜黄素较高。 ④B6对小鼠无明显的急性毒性作用。