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猫疱疹病毒I型（Feline herpesvirus-1,FHV-1）是猫传染性鼻气管炎的病原体,可引起猫科动物急性、高度接触性上呼吸道疾病。FHV-1属于疱疹病毒科,甲型疱疹病毒亚科成员,为双股DNA病毒。FHV-1隐性感染和感染后康复的猫能长期带毒和排毒,成为传染源。同其他疱疹病毒一样,FHV-1可潜伏在猫的三叉神经节,并在猫免疫力低下时再激活而导致发病,给该病的防控造成困难。因此,加强对国内FHV-1流行毒株的分离鉴定及诊断方法的建立对该病的防控具有重要意义。本研究首先从病猫眼鼻拭子中分离病毒,进行一系列鉴定。结果表明该分离株可在CRFK细胞上产生典型CPE,病毒滴度可达到108 TCID50/mL。电镜下观察到圆形、有囊膜、直径大小约150 nm的病毒颗粒。提取病毒基因组,扩增gD基因,得到一条1125 bp大小的特异性条带,经测序分析发现其与标准毒株FHV-1 C-27 gD基因序列相似性达100%,表明该分离株为FHV-1,命名为HR-1。IFA结果显示接种HR-1的CRFK细胞出现特异性荧光。动物回归试验结果显示,HR-1感染家猫后,临床主要表现为眼结膜炎和鼻气管炎;病理切片发现肺脏上皮细胞组织增生,肾小管上皮细胞空泡化、坏死等;利用Real-time qPCR方法,能从感染猫的眼、鼻拭子中检测到病毒核酸,且在感染后第4-6天病毒载量达到最高峰,同时证明HR-1在三叉神经中可以复制。HR-1对家猫的致死率可达100%,表明HR-1对家猫有较强的致病性。其次,选取高度保守且免疫原性好的gD糖蛋白为研究对象,利用TMHMM Server v.2.0和BepiPred 1.0 server在线软件预测gD蛋白的跨膜区及抗原表位富集区,确定了从505 bp-987 bp为gD抗原表位富集区,该片段长483 bp;克隆表达gD抗原表位富集区,制备了重组gD-483蛋白,经SDS-PAGE、Western blot分析,gD-483蛋白具有良好的抗原性且为可溶性表达。将其作为包被抗原,建立FHV-1抗体间接ELISA诊断方法。结果显示gD-483重组蛋白的最佳包被浓度为2ng/μL,时间为37°C 2 h;待检血清最佳稀释度为1:400,作用时间为37°C 45 min;二抗最佳稀释度为1:8000,作用时间为37°C 45 min;底物最佳显色时间为37°C 5 min。确定阴阳性血清的临界值为0.432;与FCV、FPV、FIPV-1、FIPV-2阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;组内、组间变异系数均小于10%,重复性良好;FHV-1的阳性血清稀释至1:3200仍显示为阳性,敏感性好;与IFA比对试验符合率92%。利用建立的间接ELISA方法检测100份猫血清样品,抗体阳性率为77%。本研究分离并鉴定了一株国内FHV-1 HR-1,对其进行致病性分析,可为猫传染性鼻气管炎疫苗的评价提供效力检验用强毒;以gD重组蛋白为包被抗原建立的间接ELISA诊断方法,操作简便,可为FHV-1感染的防控奠定基础。