【摘 要】
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该研究主要结果如下:1.成功地从成年雄性小鼠颌下腺组织中,通过RT-PCR的方法获得小鼠NFG基因的cDNA克隆;2.成功地从中国男性新鲜颌下腺组织中,通过RT-PCR的方法获得中国人NGF
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该研究主要结果如下:1.成功地从成年雄性小鼠颌下腺组织中,通过RT-PCR的方法获得小鼠NFG基因的cDNA克隆;2.成功地从中国男性新鲜颌下腺组织中,通过RT-PCR的方法获得中国人NGF基因的cDNA克隆,将所得克隆的核苷酸序列测序结果与国外报道的人NGF的cDNA序列进行比较后,发现有四个碱基不一致,即cDNA第207位T→C,对应的亮氨酸Leu→脯氨酸Pro,第273位T→C,对应的缬氨酸Val→丙氨酸Ala,第607位G→A,对应的赖氨酸Lys→融氨酸Lys,第749位A→G,对应的脯氨酸Pro→丝氨酸Ser,其余的序列与查得的cDNA序列均一致;3.成功地从中国男性新鲜血液中分离白细胞,然后通过RT-PCR的方法两次获得中国人NGF基因的cDNA克隆,将所得克隆的核苷酸序列测序结果与国外报道的人NGF的cDNA序列进行比较后,发现均有一个碱基不一致,即cDNA第273位T→C,对应的缬氨酸Val→丙氨酸Ala,其余的序列与查得的cDNA序列均一致;4.成功地从外国人基因组DNA上,通过PCR获得表达人NGF成熟蛋白片段即βNGF的基因克隆;5.将人NGF成熟片段克隆至pET16b载体,实现天然蛋白表达;6.将人NGF成熟片段克隆至pGEX4T3载体,实现融合蛋白表达.该研究成功地进行了小鼠NGF和中国人NGF cDNA的基因克隆;确认中国人NGF具有一定的特异性,其在cDNA每273位碱基为C而非T,对应的氨基酸为丙氨酸Ala而非缬氨酸Val;构建了pET16b-NGF表达质粒,并利用它进行了人NGF成熟蛋白片段在大肠杆菌中的天然蛋白表达;构建了pGEX4T3-NGF表达质粒,并利用它进行了人NGF成熟蛋白片段与谷胱甘肽-S转移酶在大肠杆菌中的融合蛋白表达.
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