【摘 要】
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RRD3是通过变性-复性动力学从水稻基因组中克隆到的一个中度重复序列.该实验确证该序列在大肠杆菌有启动四环素抗性表达的活性,在四环素浓度为10-100ng/ml时,对照菌株已不能
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RRD3是通过变性-复性动力学从水稻基因组中克隆到的一个中度重复序列.该实验确证该序列在大肠杆菌有启动四环素抗性表达的活性,在四环素浓度为10-100ng/ml时,对照菌株已不能生长,而含有RRD3质粒的菌株依然生长.将RRD3亚克隆到氯霉素乙酰基转移酶基因为报告基因的哺乳动物细胞表达载体上,转染五种哺乳动物细胞,在CHO、3T3细胞中可以检测到报告基因的表达,说明RRD3在这两种哺乳动物细胞中具有启动基因表达的活性.利用核酸外切酶Ⅲ和PCR从RRD3的5端构建了6个序列缺失体.缺失体转染后的CAT活性变化显示该序列中含有多个与哺乳动物细胞中启动基因表达有关的序列,初步推测:0-100bp、200-440bp和700bp-820bp间很可能含有正调控序列;100-200bp和440-700bp间很可能含有负调控序列.其中,pCAT-B3+150和pCAT-B3+600可以作为TAC载体改造候选启动子片段.同时结合RRD3在大肠杆菌和高等植物烟草和水稻中启动报告基因表达的活性,对重复序列与生物进化的关系进行了讨论.
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