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目的霍山石斛又称米斛,为兰科石斛属植物霍山石斛Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng的茎,特产于安徽霍山县,为安徽珍贵道地药材之一,素有“药界大熊猫”等美誉,民间称其为救命仙草,具有益胃生津、润肺止咳、滋阴清热、清音明目的功效。（1）1995年至2015年版《中华人民共和国药典》石斛药材标准未明确收载霍山石斛,没有明确霍山石斛的原植物种和鉴别及含量检测指标,急需建立一套霍山石斛质量标准来区分和鉴别霍山石斛。（2）针对目前霍山石斛商品市场混乱,充斥着各种假冒伪劣“霍石斛”、“霍斗”、“金霍斛”的现象,有必要建立一种快速鉴别霍山石斛及其近缘种的方法以规范市场流通。方法（1）观察描述各种商品规格的霍山石斛（鲜条、干条、枫斗、粉末）的性状特征,在显微镜下观察霍山石斛的细胞形状、组织构造和后含物,描述其显微特征;（2）采用薄层色谱技术对霍山石斛黄酮类成分进行研究,通过斑点的位置、数量和大小的差别,将霍山石斛与其近缘种石斛区分开来,采用薄层色谱结合静电场诱导喷雾电化化合物耦合到质谱（TLC-EFISI-MS）方法对霍山石斛专属性斑点进行定性鉴别;（3）采用高效液相色谱技术对25批霍山石斛样品进行研究,建立对霍山石斛黄酮类成分定性定量的分析方法,利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件（2012版）、SPSS软件和SIMCA软件,对霍山石斛与40种共计54批石斛进行相似度分析、主成分分析（PCA）、聚类分析（CA）;利用高效液相色谱法测定霍山石斛中维采宁-2、维采宁-1和夏佛塔苷的含量;（4）霍山石斛多糖含量采用苯酚-硫酸法测定;HPLC-DAD法测定霍山石斛中甘露糖的含量并检测其甘露糖和葡萄糖峰面积比;（5）常规项目研究:参照2015年版《中国药典》中的水分测定法-烘干法（通则0832）、浸出物测定法-热浸法测定醇溶性浸出物（通则2201）,测定霍山石斛药材的水分及醇浸出物含量。结果（1）霍山石斛性状、显微特征的观察结果与前人的研究基本一致。（2）通过对霍山石斛药材的薄层方法研究,建立了简便易行、专属性强的薄层鉴别方法:以水饱和正丁醇为展开剂,低温4℃展开,2%三氯化铝乙醇溶液为显色剂,105℃加热5 min,于紫外光（366 nm）下观察。比较霍山石斛与其近缘种石斛的薄层色谱行为,发现霍山石斛有一专属性斑点,通过该斑点可实现霍山石斛与同属13种石斛的鉴别,且能够将掺杂50%以上铁皮石斛粉的霍山石斛鉴别出来;应用TLC-EFISI-MS技术进一步对霍山石斛专属性斑点进行了定性表征,根据多级质谱分析结果推测该斑点为黄酮类化合物芹菜素-6-C-?-L-鼠李糖基-（1→2）-?-D-萄糖苷-8-C-?-L-阿拉伯糖。（3）建立了霍山石斛黄酮类成分的HPLC定性定量分析方法:以乙腈和水为流动相,乙腈梯度洗脱范围7%～18%,检测波长340 nm,柱温40℃,流速1 m L/min;25批霍山石斛药材共标定了15个共有色谱峰,且指认了其中的3个色谱峰:维采宁-2、维采宁-1和夏佛塔苷;运用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件（2012版）,对霍山石斛和40种石斛进行了比较研究,结果显示霍山石斛与其他近缘种石斛有显著差异,相似度较低;在一定线性范围内,建立了维采宁-2与维采宁-1、夏佛塔苷的相对校正因子,用外标法测定了3种黄酮类化合物在25批霍山石斛中的含量,并用所建立的相对校正因子计算了维采宁-1和夏佛塔苷的含量,结果发现外标法（ESM）测定的维采宁-1、夏佛塔苷的含量与一标多测法（QAMS）的含量结果间没有显著差异（QAMS计算值占ESM实测值的比例均大于98%,PD＜2%,Cos（θ）=1）。（4）18批霍山石斛药材的水分平均含量为9.35%,多糖平均含量为24.58%,甘露糖含量在5.20%～34.71%之间,平均值为16.40%,甘露糖与葡萄糖峰面积比范围为0.36～3.23。对17批霍山石斛药材醇溶性浸出物进行测定分析,结果显示霍山石斛浸出物的平均含量为15.28%。结论（1）采用性状与显微鉴别相结合的方法,为霍山石斛药材的初步鉴定提供了参考,可以很好的鉴别霍山石斛与大部分近缘种石斛;（2）所建立的霍山石斛薄层色谱方法专属性强,能够有效快速鉴别霍山石斛与13种同属近缘种石斛,且能够判断霍山石斛是否掺杂了50%以上的铁皮石斛;（3）研究建立的HPLC特征图谱方法简单,分离效果好,通过分析石斛大极性部分成分能够区分鉴别霍山石斛与同属其他40种石斛,该研究为霍山石斛的鉴别提供了化学依据;一标多测法建立的校正因子重现性良好,QAMS计算值和ESM实测值基本一致,表明在一定的线性范围内,可利用一标多测法测定霍山石斛中维采宁-2与维采宁-1、夏佛塔苷的含量;（4）按照平均值上下浮动20%的指导意见,结合实际情况,初步建议规定霍山石斛各项指标的限度为:水分不得过11.0%,醇溶性浸出物不得少于12.0%,甘露糖与葡萄糖峰面积比为0.3～3.6。多糖含量不得少于19.0%,甘露糖含量范围为6.0%～28.0%。各项目的检测与限度制定,为霍山石斛药材的质量控制提供了实验依据、技术参考,对霍山石斛的鉴定及质量控制具有指导意义和参考价值。