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背景及目的：肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率呈现逐年上升趋势，且致死率极高。全身化疗作为中晚期肝癌患者的重要治疗手段之一，其疗效并不理想，主要原因是肝癌的多药耐药。肝癌多药耐药的机制复杂，目前研究认为其主要机制包括膜转运蛋白介导的药物外排，凋亡调控基因介导的细胞凋亡，各类酶介导的耐药等。其中膜转运蛋白介导的肝癌多药耐药机制是最重要的机制。ABC转运蛋白中的P-gp蛋白在肝癌组织中高表达，且在耐药细胞中这种高表达更为明显。ABCG2蛋白的表达则与药物环境有关，在药物环境中，其表达增加，可以加速肝癌细胞内药物的外排，因此P-gp和ABCG2蛋白在肝癌膜转运蛋白介导的药物外排泵机制中起重要作用。miRNA是一种由21-25个核苷酸组成的单链小分子RNA，广泛存在于真核生物中，是一类在进化上高度保守的不编码蛋白质的短序列RNA，参与转录后水平的调节，并对细胞增殖、分化、凋亡等多种生物学过程进行调控，与人类多种疾病相关。目前大量研究表明miRNA作为抑癌基因或癌基因与肿瘤的发生发展具有密切关系。有报道显示miR-130a和miR-212通过不同的机制参与了多种肿瘤的多药耐药，但与肝癌的相关报道少见，且很多机制尚不明确。因此本研究以HepG2细胞和HepG2/Adr细胞(阿霉素耐药HepG2细胞)为对象，采用miRNA芯片技术寻找与肝癌耐药膜蛋白相关的差异miRNA，并通过qPCR技术对候选的差异表达的miRNA进行验证，旨在深入地了解有哪些miRNA可能参与了对肝癌耐药蛋白及编码基因的调控，为后续对筛选出来的miRNA进行功能学检测提供研究基础。该研究将进一步揭示肝癌耐药机制，有助于为提高肝癌的综合治疗疗效寻找到一条新途径。方法：1.运用MTT法对HepG2与HepG2/Adr细胞对阿霉素的耐药性差异进行检测2.运用Exiqon miRNA表达谱芯片技术检测3100条人，小鼠，大鼠三物种全部miRNA以及上述三物种相关的所有病毒的miRNA以及25个miRPlus人miRNA在HepG2与HepG2/Adr细胞内的表达水平差异，应用分层聚类分析获得差异表达的miRNA谱，并根据相关文献报道选择miR-130a和miR-212作为候选miRNA。3.运用qPCR技术对HepG2与HepG2/Adr细胞中MDR1，ABCG2，miR-130a，miR-212基因表达进行检测，qPCR结果采用2-Ct法进行分析。4.实验数据均采用SPSS17.0统计软件分析。实验数据用均数±标准差表示，使用单因素方差分析及t检验来比较组间差异，P值<0.05为差异有统计学差异。结果：1. HepG2/Adr细胞对阿霉素的耐药指数是HepG2细胞的2.968倍，HepG2/Adr细胞对ADM具有更强的耐药性。2. miRNA芯片检测结果表明存在HepG2/Adr特异性的miRNA谱，共筛选出236个差异表达的miRNA，其中118个miRNA上调，118个miRNA下调。纳入标准为上调和下调均超过2倍。miR-130a和miR-212在耐药株和非耐药株中存在明显差异。3.通过qPCR法检测我们发现，在HepG2中MDR1基因相对表达量是在HepG2/Adr中的0.094倍（P<0.05）；在HepG2中ABCG2基因相对表达量是在HepG2/Adr中的0.47倍（P<0.05）；在HepG2中miR-130a基因相对表达量是在HepG2/Adr中的4.057倍（P<0.05）；在HepG2中miR-212基因相对表达量是在HepG2/Adr中的5.434倍（P<0.05），结果均具有统计学意义。结论：1．HepG2/Adr具有特异性的miRNA表达谱，这些特异性的miRNA可能参与了肝癌多药耐药的调控。2．MDR1和ABCG2在HepG2/Adr株中上调，MDR1和ABCG2可能共同参与了肝癌膜蛋白介导的多药耐药机制。3．miR-130a和miR-212在HepG2/Adr细胞株中下调，两者是否参与肝癌膜蛋白的调控尚需要做相关功能学检测以证实。