目的： 获取理想种子细胞——具有相应功能的自体活性细胞，是目前TEHV研制的重点，寻找一条便捷、有效的获取种子细胞的方法，并完善内皮化，是构建TEHV的核心问题。本课题取材骨髓，分离得到内皮祖细胞(EPCs)和骨髓间充质干细胞(MSCs)，体外培养、扩增、分化，种植于去细胞猪主动脉瓣支架材料，进行构建TEHV实验研究，探讨EPCs联合MSCs构建TEHV的可行性和条件，为新型组织工程心脏瓣膜种子细胞的选择提供实验基础。 方法： 1．采用免疫磁珠和贴壁换液两种方法，分离得到EPCs和MSCs，进行体外培养扩增、分化、鉴定及一般生物学特性研究：①内皮细胞条件培养基培养，纤维粘连蛋白包被培养皿，以EGF、IGF-1、VEGF等生长因子诱导EPCs分化，采用免疫组化CD31、Ⅷ因子相关抗原染色、流式细胞仪与电镜鉴定，以荆豆凝集素吸收试验(UEA-1)、乙酰化低密度脂蛋白(DiI-Ac-LDL)摄取试验以及合成分泌NO评价内皮细胞功能：同时，在EPCs培养中加入他汀类药物，观察EPCs增殖和迁移情况。②DMEM培养基培养扩增，以5-Aza诱导MSCs分化，采用α-SMA、Vimentin免疫组化染色鉴定其分化表达，以免疫组化Ⅰ、Ⅲ胶原染色评价其分泌功能。③通过对获得EPCs细胞数量和纯度的分析，比较免疫磁珠和贴壁换液两种方法的优缺点。