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本课题从四种市售发酵蔬菜中共分离到18 个具有乳酸菌特征的菌株,对18 个菌株进行了初步鉴定和筛选,并对筛选出的5 个菌株进行生理特性和培养条件的研究。结合藠头发酵结果,从5 个菌株中进一步筛选出2 个适合藠头发酵的菌株,以发酵液的pH 值,存活率为指标,对两个菌株进行了培养基成分,发酵条件,菌体收集方法,冻干保护剂,冻干时间和冻干后菌数变化进行了系统的研究,旨在为直投式藠头发酵菌剂的工业生产提供依据。研究结果表明:
1. 不同的蔬菜由于其营养成分的差别,各自适应不同种类的乳酸菌的生长,其中白菜中以短乳杆菌和链球菌为主,辣椒中短乳杆菌和片球菌更容易繁殖,萝卜中以短乳杆菌为主,藠头中以短乳杆菌为主。
2. 对初步筛选出的5 株乳酸菌进行生理特性和培养条件的研究,经试验表明:菌株C1 能耐酸pH4.0,耐盐8.0%,培养基装液量1/2,培养基起始PH6.0,培养温度33.0℃,接种量为5.0%;菌株P1 能耐酸pH5.0,耐盐10.0%,培养基装液量6/7,培养基起始PH6.0,培养温度33.0℃,接种量为5.0%; J1 能耐酸pH3.0,耐盐10.0%,培养基装液量2/3,培养基起始PH6.0,培养温度33.0℃,接种量为3.0%;菌株J6 能耐酸pH4.0,耐盐6.0%,培养基装液量2/3,培养基起始PH6.5,培养温度33.0℃,接种量为5.0%;菌株R1 能耐酸pH3.0,耐盐8.0%,培养基装液量3/4,培养基起始PH6.0,培养温度33.0℃,接种量为3.0%。
3. 综合菌株生理特性与藠头发酵试验的结论,挑选C1,R1 为藠头发酵菌株。发酵藠头中添加C1,能加快其发酵速度,提高其中的乳酸菌含量,但其本身没有强抑制杂菌作用,不能保证发酵质量;在发酵藠头中添加R1,能加强对杂菌的抑制,但也会抑制到有益乳酸菌,改变发酵藠头的正常发酵进程,。根据发酵液中食盐含量调整C1,R1 比例,有利于提高产品质量,降低亚硝酸盐和缩短发酵时间。
4. C1 的最佳营养成分配比为蔗糖2.0%,蛋白胨1.0%,酵母膏:牛肉膏(1:1)0.75%。R1 的最佳营养成分配比为麦芽糖2.0%,酪朊水解物2.0%,酵母膏:牛肉膏(1:1)1.0%。C1 的发酵条件为密封静止,最适pH 为6.0;R1 的发酵条件为厌氧培养,最适pH 为6.0。
5. 最佳收集条件的研究表明:C1 在4000g 下离心15min,回收率可达93.3%;R1 在4000g 下离心18min,回收率可达95.2%。
6. C1 的最佳保护剂为糊精:脱脂牛乳(1:1)115g/l,甘油30ml/l,谷氨酸钠60g/l;R1 的最佳保护剂为糊精:脱脂牛乳( 1:1)130g/l,甘油30ml/l,谷氨酸钠60g/l,最佳冻干时间为36h。冻干后C1、R1 菌剂中活菌浓度分别可达到2.13×10 11 cfu/g, 2.7×1011 cfu/g;存活率分别可达到85%, 84%。