【摘 要】
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猪流行性腹泻(Porcine viral diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine viral diarrhea virus,PEDV)引起的一种传播速度快、发病率高、以呕吐、腹泻、脱水为临床症状的一种肠道疾病。该病对各个年龄猪群均易感,但对哺乳期仔猪影响最大,对哺乳仔猪的发病率和病死率最高均可达到100%。对全球养猪行业造成的经济损失巨大,是阻碍养猪行业发展的重要原因之一。
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猪流行性腹泻(Porcine viral diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine viral diarrhea virus,PEDV)引起的一种传播速度快、发病率高、以呕吐、腹泻、脱水为临床症状的一种肠道疾病。该病对各个年龄猪群均易感,但对哺乳期仔猪影响最大,对哺乳仔猪的发病率和病死率最高均可达到100%。对全球养猪行业造成的经济损失巨大,是阻碍养猪行业发展的重要原因之一。PEDV N蛋白由PEDV N基因编码的PEDV结构蛋白,具有较高的保守性,在感染早期发挥重要作用。为了解当前PEDV N基因的序列变化和蛋白特征,本论文对2017-2018年广西部分地区PEDV N基因进行序列分析和蛋白表达。首先,本实验从本实验室保存的2017-2018年PEDV阳性病料中选取了不同时间地点的82份阳性样品,对其PEDV N基因全长进行扩增,最终得到了32条PEDV N基因序列。通过DNAstar和MEGA 5.2等分子生物学软件,将所得32条PEDV N基因序列同所选的国内外23条参考毒株进行序列分析,结果发现获得的32条序列之间的同源性为93.2%-100%,与参考序列的同源性为92.6%-99.5%。测序结果显示来自广西钦州的6条序列在第848-875核苷酸位点之间均存在由27个核苷酸缺失导致的9个氨基酸缺失,这是首次发现PEDV N基因存在基因缺失现象,其发生原因以及缺失导致的病毒变化值得深入研究。本实验还对从实验室分离保存的PEDV G2a型毒株17GXCZ-1进行了N基因的原核表达,成功构建了p ET-32a-N重组质粒,将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导进行表达,经过探索发现该重组蛋白的最佳表达条件为IPTG浓度为0.6 m M时,诱导4 h。经SDS-PAGE电泳验证融合蛋白条带大小在72 KDa左右,与预计目的片段大小相符合,证明PEDV N蛋白已成功表达,为可溶性表达。本论文获得的PEDV N基因序列信息和重组蛋白可为今后对N蛋白的深入研究提供参考。
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