【摘 要】
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大麻素(CB)受体是神经干细胞维持增殖能力的过程中不可缺少的一部分,不断受到研究者的重视。免疫组化实验发现CB1和CB2受体都存在于细胞表面。为了进一步确定CB1与CB2受体在
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大麻素(CB)受体是神经干细胞维持增殖能力的过程中不可缺少的一部分,不断受到研究者的重视。免疫组化实验发现CB1和CB2受体都存在于细胞表面。为了进一步确定CB1与CB2受体在细胞老化过程中的作用进行了本课题的研究。首先,本课题实验人员在前期的探索中发现在APP-PS1小鼠生长过程中,其脑内的β-淀粉样斑块沉积随着年龄增长不断增加,通过对转基因小鼠脑切片进行免疫组化实验,可以看出,在β-淀粉样斑块的数量与Nestin染色的活性细胞数量之间存在负相关。利用β-半乳糖苷酶老化染色实验的方法对小鼠脑切片进行处理,我们发现,脑部衰老的组织包裹在β-淀粉样沉积周围,提示β-淀粉样沉积蛋白可能引起组织细胞老化。于是在实验中选择使用Aβ1-42建立细胞老化模型。Aβ1-42连续孵育神经干细胞6天,可以提高神经干细胞的活力,而连续孵育12天时,对细胞活力产生了明显抑制作用。细胞水平的β-半乳糖苷酶染色实验结果显示,Aβ1-42孵育神经干细胞9天后,老化细胞的数量有显著增加。Western blot显示细胞中老化初期分子p16和Rb蛋白的表达量剂量依赖性上升,也进一步提示Aβ1-42能够在体外模拟AD小鼠脑内的神经干细胞老化情况。合成的NsTyr化合物是内源性大麻素相似物,前期研究表明其具有神经保护作用。实验发现,NsTyr可以显著抑制Aβ1-42诱导的细胞老化及细胞内p16和Rb蛋白的表达。而在分别加入CB1和CB2受体的阻断剂后,CB2受体的阻断剂可逆转NsTyr拮抗Aβ造成的神经干细胞老化作用,提示,NsTyr通过CB2受体发挥抗老化效应。细胞自噬功能也是对于细胞老化具有重要作用的环节,同时也受到大麻素受体的影响,为了进一步确定NsTyr的作用机制,我们研究了其对细胞自噬水平的影响。Aβ连续9天孵育后对于细胞的自噬功能出现明显的下降,NsTyr可以恢复细胞的自噬水平,提示NsTyr可以通过影响细胞自噬来减少老化细胞。CB2受体的激动剂JWH133与NsTyr具有相同的作用结果,都促进了细胞自噬,减轻细胞老化。可见,CB2受体在调控神经干细胞老化中有重要作用。
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