【摘 要】
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背景:增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）是视网膜色素上皮（RPE）细胞、神经胶质细胞和成纤维细胞在玻璃体腔和视网膜形成纤维性增殖膜,收缩、牵拉视网膜,造成牵拉性视网膜脱离的疾病。PVR发病机制复杂,其病理过程是一种纤维化改变,多种细胞及细胞因子参于其中,以RPE细胞最为重要。PVR治疗难度大,是导致视网膜脱离重新发生的常见原因,发生率约5-20%,为外科手术治疗带来巨大挑战。甲基化Cp G结合蛋白2
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背景:增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）是视网膜色素上皮（RPE）细胞、神经胶质细胞和成纤维细胞在玻璃体腔和视网膜形成纤维性增殖膜,收缩、牵拉视网膜,造成牵拉性视网膜脱离的疾病。PVR发病机制复杂,其病理过程是一种纤维化改变,多种细胞及细胞因子参于其中,以RPE细胞最为重要。PVR治疗难度大,是导致视网膜脱离重新发生的常见原因,发生率约5-20%,为外科手术治疗带来巨大挑战。甲基化Cp G结合蛋白2（Me CP2）是一种表观遗传修饰因子,参与染色质结构调节,它影响转化生长因子β2（TGF-β2）诱导的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达和RPE细胞上皮间质转化（EMT）,从而影响视网膜纤维化。目的:MeCP2能诱导RPE细胞α-SMA的表达,TGF-β2是RPE细胞EMT和α-SMA表达的主要诱导因子。本研究的目的是评估Me CP2及TGF-β2在PVR患者视网膜前膜的表达,并研究外源性Me CP2蛋白对RPE细胞TGF-β2的影响。方法:收集来自2020年1月-2020年12月河南省立眼科医院的PVR和特发性黄斑前膜患者的增殖膜,通过免疫组织化学方法观察PVR和特发性黄斑前膜增殖膜中Me CP2的表达情况;免疫荧光染色方法观察Me CP2和TGF-β2是否存在共定位;对同一批次铺板的人RPE-19细胞,用重组人Me CP2蛋白进行不同浓度（5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml）处理,PBS同剂量处理组做阴性对照,两者都未处理组为空白对照,均处理RPE-19细胞24h和48h后收集,用于蛋白质免疫印迹和实时荧光定量PCR,对人RPE-19细胞进行TGF-β2的定性及定量分析。结果:PVR患者的增殖膜免疫组织化学染色Me CP2的表达较特发性增殖膜高。在PVR增殖膜中免疫荧光染色结果显示Me CP2和TGF-β2存在免疫荧光共定位。在人RPE-19细胞培养中,蛋白质免疫印迹结果显示,当处理24小时,重组人Me CP2蛋白处理组在20ng/ml的浓度下与空白对照和重组人Me CP2蛋白10ng/ml处理浓度相比TGF-β2表达增强差异是显著的（P＜0.05）;与同剂量的阴性对照PBS处理组相比,差异性不明显（P＞0.05）。随着处理时间增加至48小时,重组人Me CP2蛋白在10ng/ml及20ng/ml的浓度下与阴性对照PBS处理组相比TGF-β2表达增强差异性显著（P＜0.05）,且随着重组人Me CP2蛋白浓度的增加,TGF-β2的表达显著增加（P＜0.0327）。实时荧光定量PCR（QPCR）结果显示重组人Me CP2蛋白处理人RPE-19细胞24小时后,20ng/ml浓度下刺激人RPE-19细胞TGF-β2基因的表达差异性显著（P＜0.01）,约为空白对照的1.5倍。当处理时间增加为48小时后,重组人Me CP2蛋白在20ng/ml的浓度下对TGF-β2表达增加至约2.5倍（P＜0.01）。结论:MeCP2在PVR增殖膜中显著表达;Me CP2和TGF-β2在PVR增殖膜中免疫荧光共定位;Me CP2可能诱导RPE细胞TGF-β2表达的上调;Me CP2对TGF-β2表达的上调呈现一定程度的时间和剂量依赖性;Me CP2和TGF-β2可能成为未来治疗PVR的新靶点。
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