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第一章:临床研究结直肠癌肝转移临床多因素分析; 目的:肝脏是结直肠癌转移常见和好发部位,该部分探讨结直肠癌肝转移的临床相关因素,旨在为临床医生判别结直肠癌肝转移的危险病人提供较为可靠的依据.方法:收集中山医科大学肿瘤医院1988~1997年间就诊结直肠癌病例1312例,建立数据库. 结论:结直肠癌肝转移的相关因素主要有性别、肿瘤浸润深度和淋巴结转移情况.男性结直肠癌患者更易发生肝转移;肿瘤浸润肠壁越深,发生肝转移的危险越大.年龄、血型、病程、首发症状、肿瘤部位、肿瘤大小、术前合并症、并发病与肝转移无关.第二章:实验研究;PART 1:枯否细胞的分离培养与鉴定; 目的:肝脏是肿瘤转移的好发部位,而肝脏含有丰富的免疫细胞——枯否细胞(Kupffer Cell,KC).为研究枯否细胞的抗癌活性,该实验旨在探讨BALB/c鼠枯否细胞的分离培养方法. 方法: 选用健康雄性8—10周龄BALB/c鼠,麻醉无菌取肝,注射冲洗去血并剪去部分结缔组织,小玻璃瓶中剪碎肝组织,加入0.04﹪的EDTA和0.05﹪链霉蛋白酶E溶液,交替轻轻吹打消化.不锈钢筛网滤过,用0.004﹪ Dnase I的1640液清洗细胞液,加Tris一氯化胺溶解红细胞.30﹪—70﹪Percoll梯度离心,10﹪FBS贴壁培养4—6h洗去非贴壁细胞.通过对比体内、体外枯否细胞吞噬墨水和体外吞噬聚苯乙烯乳珠(latex beads,D1.1μm)鉴定枯否细胞.结论:酶消化法结合梯度离心和贴壁培养是分离BALB/c鼠枯否细胞的可靠方法,为进一步实验打下了基础.PART 2:小鼠结肠癌细胞株的传代培养及活性鉴定;目的:CT26是一株高转移的小鼠结肠癌细胞株(colon tumor 26),为该课题下一步实验需要,确定CT26的部分性质和传代培养保存方法.方法:①分直接吹打、0.5﹪胰酶消化、0.04﹪EDTA消化和0.25﹪胰酶与0.02﹪EDTA混合液消化组,观察CT26的消化方法.②在96孔板上按1×10<4>孔接种CT26细胞,每天计数,共1周,计算倍增时间.③BALB/c鼠接种CT26细胞,观察小鼠和/或肿瘤生长情况.④癌组织和腹水提取CT26细胞,体外培养观察增殖能力和再接种观察致瘤性.⑤常规用DMSO在—80℃冻存与复苏,观察增殖能力和致瘤性. 结论: 该研究使用的CT26能常规传代培养并具有致瘤性,与原始文献报道的性质基本相同. PART 3:枯否细胞及大蒜油在体外的抗癌作用; 目的: 枯否细胞是存在肝脏的重要免疫细胞,人们在长期的劳动实践中发现大蒜有抗癌作用.该文通过体外培养方法观察枯否细胞和大蒜油对CT26的抗癌活性及大蒜油对KC的毒性作用. 方法:①枯否细胞分种于96孔板,按效靶比1:1、2:1、5:1、10:1、20:1、50:1和100:1加入CT26细胞,同时设置单纯CT26细胞的对照孔,共同培养24h,MTT比色法测定细胞量.②CT26按2×10<4>/孔分种于96孔板,24h后,按37.5μg/ml、75μg/ml、150μg/ml、300μg/ml、600μg/ml和1200μg/ml浓度加入含大蒜油的培养液培养24h,MTT比色法测定细胞量.③枯否细胞分种于96孔板贴壁12h,按37.5μg/ml、75μg/ml、150μg/ml、300μg/ml、600μg/ml和1200μg/ml浓度加入含大蒜油的培养液培养24h,MTS/PMS比色法测定.差异比较用spss10.0 for windows统计软件的成组资料的单因素方差分析. 结论:枯否细胞和大蒜油对CT26有抗癌活性,一定浓度的大蒜油对枯否细胞体外培养无明显影响.PART 4:大蒜油激活鼠肝枯否细胞抗癌作用; 目的: 体外实验研究明确大蒜提取物是否能增强枯否细胞(KC)的抗肿瘤活性,并对其抗癌机理进行探讨.方法:酶消化法提取的小鼠枯否细胞,分别用含大蒜油浓度为1200μg/ml、600μg/ml、300μg/ml、150μg/ml、75μg/ml和37.5μ/ml的培养液培养24h.换洗培养液后,按10:1效靶比加入小鼠结肠癌细胞(CT26),共同培养24h.用MTT比色法测定活细胞数量,以未加药的KC/CT26共同培养和KC、CT26单独培养为对照组.收集大蒜油刺激后枯否细胞的上清液,按说明书操作测定上清液中一氧化氮(NO)和白介素18(IL-18)的浓度.差异比较用spss10.0 for windows统计软件的成组资料的单因素方差分析. 结论: 大蒜油能激活枯否细胞,从而增强其抗癌活性.激活的枯否细胞分泌NO、IL-18明显增加,枯否细胞的抗癌活性可能通过其分泌的细胞因子介导.激活枯否细胞的大蒜油浓度中,300μg/ml可能是一个恰当的选择.