论文部分内容阅读
肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）是世界卫生组织公布的十大恶性肿瘤之一，每年导致约70万人死亡。我国是HCC高发区，每年全球55%的HCC新发病例发生在中国。目前普遍认为HCC的发生是多因素、多基因、多步骤长期作用的结果。其中，乙肝病毒（Hepatitis B virus, HBV）的慢性感染是我国HCC最主要的危险因素，85%以上的HCC病例HBV呈阳性，HBV慢性感染及其导致的HCC已经成为我国严重的公共卫生负担。而中国人群在感染HBV后更容易发展为HCC的事实表明，宿主遗传易感性在HCC的发生发展中发挥重要的作用。人白细胞抗原（Human leucocyte antigen, HLA）分子与HBV感染后免疫反应有着密切的关系，其中，HLA-Ⅱ类基因在抗原提呈和免疫应答中发挥着重要作用，某些特殊的HLA基因型可能影响着HBV感染的慢性化和免疫反应的强弱。目的：探讨HLA-DP基因多态性（rs3077、rs3135021、rs2281388、rs9277535）与慢性乙肝感染及HBV相关HCC的相关性，并分析HLA遗传多态性与HBV基因型或变异在HCC发生中的交互作用，为寻找慢性乙肝感染及HBV感染后HCC相关的遗传多态性提供线索。方法：利用荧光探针-实时定量PCR法对1012例健康对照、316例无症状HBsAg携带者（Asymptomatic HBsAg carriers, ASC）、316例慢性乙型肝炎患者（Chronichepatitis B, CHB）、358例肝硬化患者（Liver cirrhosis, LC）及1021例HCC患者的HLA-DP基因的四个单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphisms, SNPs）位点进行基因型检测；利用多重PCR法鉴定ASCs、CHB、LC、HCC组中HBV基因型。Hardy-weinberg平衡检验在Internet上进行（http://ihg.gsf.de/ihg/snps. html）。数据录入与分析采用SPSS16.0统计软件，应用独立样本t检验、方差分析、χ2检验和非条件Logistic回归模型分析HLA-DP基因多态性与HBV慢性感染或HCC的关系及其与HBV基因型或变异在HCC发生中的相乘交互作用。结果：1. HLA-DP基因各位点遗传多态性与HBV慢性感染或HCC的相关性以健康人群作为对照，与C/C基因型相比，携带HLA rs3077位点C/T、T/T或T等位基因（C/T+T/T）显著降低非HCC HBV感染的风险（odds ratio [OR]=0.57,95%confidence interval [CI]=0.47-0.68; OR=0.50,95%CI=0.37-0.67; OR=0.55,95%CI=0.46-0.66），同时也降低HBV相关HCC的风险（OR=0.60,95%CI=0.49-0.72; OR=0.40,95%CI=0.30-0.55; OR=0.55,95%CI=0.46-0.66）。与G/G基因型相比，携带HLArs3135021G/A或A等位基因（G/A+A/A）显著降低非HCC HBV感染的风险（OR=0.74,95%CI=0.61-0.89；OR=0.74,95%CI=0.62-0.89），同时也显著降低HBV相关HCC的风险（OR=0.80,95%CI=0.66-0.96；OR=0.79,95%CI=0.66-0.94）。与C/C基因型相比，携带HLA rs2281388位点C/T、T/T或T等位基因（C/T+T/T）显著增加非HCC HBV感染的风险（OR=1.50,95%CI=1.23-1.83； OR=2.19,95%CI=1.69-2.83；OR=1.67,95%CI=1.38-2.01），同时也显著增加HBV相关HCC的风险（OR=1.38,95%CI=1.13-1.68；OR=2.02,95%CI=1.57-2.61；OR=1.54,95%CI=1.28-1.85）。与G/G基因型相比，携带HLArs9277535G/A、A/A基因型或A等位基因（G/A+A/A）显著降低非HCC HBV感染的风险（OR=0.70,95%CI=0.57-0.85；OR=0.39,95%CI=0.30-0.51；OR=0.60,95%CI=0.50-0.72），同时也降低HBV相关HCC的风险（OR=0.62,95%CI=0.51-0.76；OR=0.46,95%CI=0.36-0.60；OR=0.57,95%CI=0.48-0.69）。但是以非肝癌HBV感染者（ASCs、CHB、LC）作为对照，未发现HLA多态性与HCC的显著相关性。2.不同性别人群中HLA-DP遗传多态性与HBV慢性感染或HCC的相关性按性别进行分层以后，以男性健康人群作为对照，与C/C基因型相比，携带HLArs3077位点C/T、T/T基因型或T等位基因显著降低非HCC HBV感染的风险（OR=0.54,95%CI=0.43-0.67; OR=0.47,95%CI=0.33-0.66; OR=0.52,95%CI=0.42-0.65），同时也降低HBV相关HCC的风险（OR=0.60,95%CI=0.49-0.72; OR=0.40,95%CI=0.30-0.55;OR=0.55,95%CI=0.46-0.66）。与G/G基因型相比，携带HLArs3135021G/A、AA基因型或A等位基因显著降低非HCC HBV感染的风险（OR=0.64,95%CI=0.51-0.80；OR=0.50,95%CI=0.30-0.82；OR=0.62,95%CI=0.50-0.77），同时也显著降低HBV相关HCC的风险（OR=0.75,95%CI=0.61-0.92；OR=0.59,95%CI=0.38-0.92；OR=0.73,95%CI=0.59-0.88）。与C/C基因型相比，携带HLA rs2281388位点C/T、T/T基因型或T等位基因显著增加非HCC HBV感染的风险（OR=1.60,95%CI=1.26-2.03；OR=2.78,95%CI=2.04-3.81；OR=1.86,95%CI=1.49-2.32），同时也显著增加HBV相关HCC的风险（OR=1.47,95%CI=1.18-1.83；OR=2.53,95%CI=1.88-3.40；OR=1.70,95%CI=1.38-2.09）。与G/G基因型相比，携带HLArs9277535位点G/A、A/A基因型或A等位基因显著降低非HCC HBV感染的风险（OR=0.70,95%CI=0.56-0.89；OR=0.35,95%CI=0.25-0.48；OR=0.59,95%CI=0.47-0.73），同时也降低HBV相关HCC的风险（OR=0.60,95%CI=0.48-0.74；OR=0.42,95%CI=0.31-0.55；OR=0.54,95%CI=0.44-0.66）。以女性健康人群作为对照，与C/C基因型相比，携带HLA rs3077位点C/T基因型或T等位基因显著降低女性非HCC HBV感染的风险（OR=0.64,95%CI=0.45-0.92；OR=0.64,95%CI=0.46-0.90）；与G/G基因型相比，携带HLA rs9277535位点A/A基因型或A等位基因显著降低女性非HCC HBV感染的风险（OR=0.52,95%CI=0.31-0.85；OR=0.64,95%CI=0.45-0.91）。但是，以女性健康人群或女性非肝癌HBV感染者作为对照，均未发现这些多态性与HCC相关。3.不同基因型HBV感染者中HLA-DP遗传多态性与HBV相关HCC的相关性将HBV感染者按HBV基因型进行分层以后，以非肝癌HBV感染者（ASC、CHB、LC）作为对照，研究HLA-DP多态性与HBV相关HCC的关系，发现在HBV C型感染者中，rs3077TT基因型相对CC基因型能够降低HCC的发生风险（OR=0.60,95%CI=0.38-0.95），同时，与rs9277535GG基因型相比，携带AA基因型能够增加HCC的发生风险（OR=1.88,95%CI=1.26-2.80)。在HBV B型感染者中，HLA-DP多态性与HCC的发生没有相关性。4. HLA-DP多态性与HBV病毒变异在HCC发生中的交互作用分别以rs3077CC基因型与HBV基因组T1674C/G、A1762T/G1764A或G1896A的野生型组合为参照，经年龄、性别、HBV基因型和HBeAg状态校正后，发现携带rs3077C/C的HBV感染者中，T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A变异能显著增加HCC风险（AOR=2.42,95%CI=1.49-3.93；AOR=4.12,95%CI=2.68-6.34；AOR=2.05,95%CI=1.36-3.09），rs3077C/T与上述HBV变异同时作用显著增加HCC的发生风险（AOR=1.73,95%CI=1.31-2.29；AOR=2.02,95%CI=1.59-2.58；AOR=1.69,95%CI=1.32-2.15）。分别以rs3135021GG与T1674C/G、A1762T/G1764A或G1896A的野生型组合为参照，经年龄、性别、HBV基因型和HBeAg状态校正后，发现携带rs3135021GG的HBV感染者中，T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A变异能显著增加HCC风险（AOR=2.84,95%CI=1.81-4.46；AOR=5.08,95%CI=3.35-7.72；AOR=2.34,95%CI=1.59-3.45），rs3135021G/A与上述HBV变异同时作用显著增加HCC的发生风险（AOR=1.71,95%CI=1.28-2.29；AOR=2.34,95%CI=1.82-3.00；AOR=1.71,95%CI=1.33-2.19）。分别以rs2281388CC与T1674C/G、A1762T/G1764A或G1896A的野生型组合为参照，经年龄、性别、HBV基因型和HBeAg状态校正后，携带rs2281388C/C的HBV感染者中，T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A变异能显著增加HCC风险（AOR=2.72,95%CI=1.37-5.39；AOR=4.16,95%CI=2.19-7.81；AOR=2.53,95%CI=1.41-4.55），rs2281388C/T与上述HBV变异同时作用显著增加HCC的发生风险（AOR=1.66,95%CI=1.27-2.19；AOR=2.11,95%CI=1.58-2.82；AOR=1.67,95%CI=1.31-2.14）。分别以rs9277535GG与T1674C/G、A1762T/G1764A或G1896A的野生型组合为参照，经年龄、性别、HBV基因型和HBeAg状态校正后，携带rs9277535G/G的HBV感染者中，T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A变异能显著增加HCC的风险（AOR=2.53,95%CI=1.45-4.43；AOR=3.35,95%CI=2.09-5.38；AOR=3.12,95%CI=1.94-5.02），rs9277535A/A与A1762T/G1764A同时作用显著增加HCC的发生风险（AOR=1.86,95%CI=1.30-2.67）。但是，HLA-DP多态性与T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A之间均不存在相乘交互作用。按HBV基因型进行分层以后，分别以rs9277535G/G与各HBV变异的野生型组合为参照，经年龄和性别校正后，发现在C型HBV感染者中，同时携带rs9277535A/A与A1762T/G1764A或G1896A变异能显著增加HCC的发生风险（AOR=1.77,95%CI=1.25-2.49；AOR=1.28,95%CI=0.85-1.93），此外，rs9277535与T1674C/G在HCC的发生中存在显著的相乘交互作用（AOR=0.31,95%CI=0.10-0.97）。5. HLA-DP基因多态性与HBV基因型在HCC发生中的交互作用经年龄、性别、HBeAg状态校正后，rs3077C/C基因型携带者中，HBV C型显著增加HCC的发生风险（AOR=2.18,95%CI=1.51-3.15），HBV C型与rs3077C/T同时作用显著增加HCC发生风险（AOR=1.48,95%CI=1.22-1.80）。rs3135021G/G携带者中，HBV C型显著增加HCC的发生风险（AOR=1.90,95%CI=1.33-2.70），HBV C型与rs3135021G/A同时作用显著增加HCC发生风险（AOR=1.49,95%CI=1.23-1.81）。rs2281388C/C携带者中，HBV C型显著增加HCC的发生风险（AOR=3.05,95%CI=1.60-5.82），HBV C型与rs2281388C/T同时作用显著增加HCC发生风险（AOR=1.74,95%CI=1.28-2.37）。rs9277535G/G携带者中, HBV C型显著增加HCC的发生风险（AOR=2.17,95%CI=1.43-3.28）, HBV C型与rs9277535G/A同时作用显著增加HCC发生风险（AOR=1.32,95%CI=1.08-1.62），但是，HBV基因型与HLA-DP多态性之间不存在显著的相乘交互作用。并且按性别进行分层后，在男性或女性中，均未发现HBV基因型与HLA-DP之间存在显著的相乘交互作用。结论：1. rs3077T、rs3135021A、rs9277535A等位基因降低HBV感染风险，rs2281388T等位基因增加HBV感染风险；2. rs9277535A/A基因型增加C型HBV感染者发生HCC的风险；3. rs9277535与T1674C/G在C型HBV感染者发生HCC的过程中具有显著的相乘交互作用。