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食品安全是世界各国关注的公众健康问题。由食品中的病原微生物导致的食源性疾病,对人类的健康构成了严重的威胁。金黄色葡萄球菌、志贺氏菌作为目前最常见的引起食物中毒的病原菌,广泛存在于自然界中,食品很容易受其污染。因此建立一种简便、快速、有效可行地检测两种菌的方法,实时检测其在食品加工、贮藏、销售等环节的污染情况,以保障食品安全和消费者健康。本研究利用免疫磁珠富集,量子点荧光标记,微型光纤光谱仪对金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌进行定量检测,建立荧光强度与菌浓度的定量模型,并对捕获条件进行优化。取得的主要研究结果如下:(1)制备连接金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌具有特异性的免疫纳米磁珠,免疫磁对103CFU/mL的混合菌液进行免疫捕获,捕获过程中结合传统平板计数的方法,通过捕获效率的比较,优化试验,结果表明两种目标菌的最佳捕获条件为免疫捕获时间45min、磁分离时间1.5min、PBS浓度0.01mol/L。(2)在最佳捕获条件下,对103~105CFU/mL的金黄色葡萄球菌捕获效率为33.29%~40.86%,对103~105CFU/mL的志贺氏菌捕获效率为83.41%~91.06%,该免疫磁珠对不同浓度菌液的捕获效率相对比较稳定,这种免疫磁捕获两种菌的方法可以捕获到101CFU/mL浓度的菌液,灵敏度高。对浓度为103CFU/mL混合菌液免疫捕获,得到联合捕获的效率分别略低于单独捕获的效率,这是由连接不同抗体的纳米磁珠之间有相互影响导致的。(3)量子点标记及荧光检测,得出当两种菌液浓度在102~105CFU/mL范围内,原菌液中菌浓度的对数值(lg N)与荧光强度(FI)呈较好的线性关系,目标菌与荧光强度的线性关系为:金葡菌FI=9.2744lgN+50.14,志贺菌FI=18.616lgN+53.784。N为目标菌细菌菌落数,CFU/mL;FI为荧光强度值。金葡菌决定系数R2=0.9626,志贺菌决定系数R2=0.9778,具有很好的拟合性。(4)目标菌浓度的预测值与实测值相差不大,模型准确性高。特异性测试结果表明,模型有良好的特异性。重复性测试结果中相对标准偏差为2.9%,检测时间在2h之内。(5)按已建立的免疫荧光检测方法对含有金黄色葡萄球菌浓度、福氏志贺氏菌混合菌液浓度为105CFU/mL的羊肉卷洗水样品检验,得到的荧光发射峰不明显,荧光强度值与空白值接近,检测效果不理想。因此,要将该方法用于实际样品的检测,需进一步研究减少或消除样品中基质的干扰。本研究将免疫磁珠分离技术和量子点荧光标记技术联用,建立了对金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌的快速、定量免疫荧光检测方法,整个检测时间在2h之内,可以满足实时检测的需求。为后续该方法用于食品样品检测的研究提供了可参考的依据。本文建立的检测方法,简单、快速、灵敏度高、特异性好,具有很好的应用前景。