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目的:本实验采用经典的腹腔注射CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的模型,通过对模型动物血清中主要生化指标参数的检测、考察肝组织病理变化、炎症反应、氧化应激反应以及相关凋亡蛋白对急性肝损的影响,揭示棒柄花叶水提物对急性肝损伤的保护作用及机制,为临床急性肝损伤治疗提供实验依据。方法:1.选择KM小鼠90只作为研究对象。SPF级,雄性,重20~22 g。将90只小鼠分为6组,每组15只:正常对照组、CCl4模型组、棒柄花叶水提物低、中、高剂量组(1.2g/kg、2.4g/kg、4.8g/kg)、阳性组(200mg/kg联苯双酯)。除正常对照组和模型组外,其余各组给予相应药物(棒柄花叶水提物或联苯双酯滴丸),0.1ml/10g灌胃给药1次/d,共7d;正常对照组和CCl4模型组的小鼠连续7d接受等体积的生理盐水(i.g)。除正常组外,其它各组小鼠末次给药2h后,以0.1ml/10g腹腔注射0.2%CCl4橄榄油,造模后小鼠禁食不禁水,16h后称体重,摘眼球取血,处死,收集血液和肝脏标本。2.取各组小鼠肝脏,称重,计算肝脏指数。3.根据市售试剂盒说明书要求检测血清中丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、GLB和总蛋白(TP)的含量。4.苏木精-伊红(HE)染色,显微镜下观察各组肝脏组织病理变化。5.采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定血清中白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平。6.采用硫代巴比妥酸法(TBA)检测血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原性谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。7.采用实时荧光定量PCR检测肝组织中Nrf2和HO-1m RNA的表达含量。8.(1)Western blotting法检测肝组织中细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达。(2)Western blotting法检测肝组织中Nrf2蛋白表达。结果:1.对小鼠血清生化指标的影响。与正常组相比,模型组的ALT值、AST值显著升高(P<0.01或P<0.05)。与模型组相比,阳性组、棒柄花叶水提物低、中、高剂量组的ALT值显著降低(P<0.01或P<0.05)。与模型组相比,棒柄花叶水提物高剂量组的AST值显著降低(P<0.05),棒柄花叶水提物低剂量组的ALB值显著降低(P<0.01),棒柄花叶水提物高剂量组的ALB值显著降低(P<0.05),棒柄花叶水提物低剂量组的TP值显著降低(P<0.05)。2.肝组织病理学。经过CCl4处理过的模型组小鼠,肝小叶结构变模糊,肝细胞索排列紊乱,肝细胞正常结构消失出现片状坏死,有炎性细胞浸润小灶,残留的细胞胞体肿胀,出现空泡变性,胞质疏松淡染。与模型组相比,阳性组和棒柄花叶水提物各剂量组肝细胞索排列尚整齐,肝小叶结构尚清晰,有较少炎性细胞,胞体略肿胀,有少量空泡细胞,较模型组有所改善。3.对小鼠血清中的炎症因子的影响。与正常组相比,模型组的IL-6值和TNF-α值显著升高(P<0.01),IL-10值显著降低(P<0.01)。与模型组相比,阳性组的TNF-α值和IL-10值显著降低(P<0.05),棒柄花叶水提物低、中、高剂量组的IL-6值、TNF-α值显著降低(P<0.01或P<0.05),棒柄花叶水提物中、高剂量组的IL-10值显著升高(P<0.01)。4.对小鼠体内氧化应激水平的影响。与正常组相比,模型组的MDA显著升高(P<0.01),SOD、GSH和GSH-Px显著降低(P<0.01)。与模型组相比,阳性组的MDA显著降低(P<0.05),SOD显著升高(P<0.01),棒柄花叶水提物中、高剂量组MDA显著降低(P<0.01),SOD、GSH-Px显著升高(P<0.01)。5.肝脏中Nrf2和HO-1m RNA相对表达量:与正常组相比,模型组的Nrf-2、HO-1显著降低(P<0.01或P<0.05)。与模型组相比,阳性组、棒柄花叶水提物中、高剂量组Nrf-2显著升高(P<0.01),棒柄花叶水提物低、中、高剂量组HO-1显著升高(P<0.05)。6.对凋亡相关蛋白及Nrf2蛋白的影响。(1)对凋亡蛋白的影响:与正常组相比,模型组Bax和Caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01),Bcl-2的表达显著降低(P<0.01)。与模型组相比,阳性组、棒柄花叶水提物低、中、高剂量组Bax的表达均显著降低(P<0.01),阳性组、棒柄花叶水提物中剂量组Bcl-2的表达显著升高(P<0.05或P<0.01),阳性组、棒柄花叶水提物低、中、高剂量组Caspase-3的表达均明显降低(P<0.01)。(2)对Nrf2蛋白的影响:与正常组相比,模型组Nrf-2的表达显著降低(P<0.05)。与模型组相比,阳性组、棒柄花叶水提物中、高剂量组Nrf-2的表达显著增加(P<0.01)。结论:棒柄花叶在CCl4所致急性肝损伤小鼠中能减轻肝损伤,能改善小鼠肝功能水平,其机制可能通过调控凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2和Caspase-3)及Nrf2蛋白,抑制细胞凋亡和氧化应激水平、降低炎症因子水平来减轻肝损伤。这为肝损伤及相关疾病的机制研究及药物开发提供了潜在的依据。