棒柄花叶水提物对四氯化碳所致急性肝损伤小鼠的保护作用及其机制研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ysc4444
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目的:本实验采用经典的腹腔注射CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的模型,通过对模型动物血清中主要生化指标参数的检测、考察肝组织病理变化、炎症反应、氧化应激反应以及相关凋亡蛋白对急性肝损的影响,揭示棒柄花叶水提物对急性肝损伤的保护作用及机制,为临床急性肝损伤治疗提供实验依据。方法:1.选择KM小鼠90只作为研究对象。SPF级,雄性,重20~22 g。将90只小鼠分为6组,每组15只:正常对照组、CCl4模型组、棒柄花叶水提物低、中、高剂量组(1.2g/kg、2.4g/kg、4.8g/kg)、阳性组(200mg/kg联苯双酯)。除正常对照组和模型组外,其余各组给予相应药物(棒柄花叶水提物或联苯双酯滴丸),0.1ml/10g灌胃给药1次/d,共7d;正常对照组和CCl4模型组的小鼠连续7d接受等体积的生理盐水(i.g)。除正常组外,其它各组小鼠末次给药2h后,以0.1ml/10g腹腔注射0.2%CCl4橄榄油,造模后小鼠禁食不禁水,16h后称体重,摘眼球取血,处死,收集血液和肝脏标本。2.取各组小鼠肝脏,称重,计算肝脏指数。3.根据市售试剂盒说明书要求检测血清中丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、GLB和总蛋白(TP)的含量。4.苏木精-伊红(HE)染色,显微镜下观察各组肝脏组织病理变化。5.采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定血清中白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平。6.采用硫代巴比妥酸法(TBA)检测血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原性谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。7.采用实时荧光定量PCR检测肝组织中Nrf2和HO-1m RNA的表达含量。8.(1)Western blotting法检测肝组织中细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达。(2)Western blotting法检测肝组织中Nrf2蛋白表达。结果:1.对小鼠血清生化指标的影响。与正常组相比,模型组的ALT值、AST值显著升高(P<0.01或P<0.05)。与模型组相比,阳性组、棒柄花叶水提物低、中、高剂量组的ALT值显著降低(P<0.01或P<0.05)。与模型组相比,棒柄花叶水提物高剂量组的AST值显著降低(P<0.05),棒柄花叶水提物低剂量组的ALB值显著降低(P<0.01),棒柄花叶水提物高剂量组的ALB值显著降低(P<0.05),棒柄花叶水提物低剂量组的TP值显著降低(P<0.05)。2.肝组织病理学。经过CCl4处理过的模型组小鼠,肝小叶结构变模糊,肝细胞索排列紊乱,肝细胞正常结构消失出现片状坏死,有炎性细胞浸润小灶,残留的细胞胞体肿胀,出现空泡变性,胞质疏松淡染。与模型组相比,阳性组和棒柄花叶水提物各剂量组肝细胞索排列尚整齐,肝小叶结构尚清晰,有较少炎性细胞,胞体略肿胀,有少量空泡细胞,较模型组有所改善。3.对小鼠血清中的炎症因子的影响。与正常组相比,模型组的IL-6值和TNF-α值显著升高(P<0.01),IL-10值显著降低(P<0.01)。与模型组相比,阳性组的TNF-α值和IL-10值显著降低(P<0.05),棒柄花叶水提物低、中、高剂量组的IL-6值、TNF-α值显著降低(P<0.01或P<0.05),棒柄花叶水提物中、高剂量组的IL-10值显著升高(P<0.01)。4.对小鼠体内氧化应激水平的影响。与正常组相比,模型组的MDA显著升高(P<0.01),SOD、GSH和GSH-Px显著降低(P<0.01)。与模型组相比,阳性组的MDA显著降低(P<0.05),SOD显著升高(P<0.01),棒柄花叶水提物中、高剂量组MDA显著降低(P<0.01),SOD、GSH-Px显著升高(P<0.01)。5.肝脏中Nrf2和HO-1m RNA相对表达量:与正常组相比,模型组的Nrf-2、HO-1显著降低(P<0.01或P<0.05)。与模型组相比,阳性组、棒柄花叶水提物中、高剂量组Nrf-2显著升高(P<0.01),棒柄花叶水提物低、中、高剂量组HO-1显著升高(P<0.05)。6.对凋亡相关蛋白及Nrf2蛋白的影响。(1)对凋亡蛋白的影响:与正常组相比,模型组Bax和Caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01),Bcl-2的表达显著降低(P<0.01)。与模型组相比,阳性组、棒柄花叶水提物低、中、高剂量组Bax的表达均显著降低(P<0.01),阳性组、棒柄花叶水提物中剂量组Bcl-2的表达显著升高(P<0.05或P<0.01),阳性组、棒柄花叶水提物低、中、高剂量组Caspase-3的表达均明显降低(P<0.01)。(2)对Nrf2蛋白的影响:与正常组相比,模型组Nrf-2的表达显著降低(P<0.05)。与模型组相比,阳性组、棒柄花叶水提物中、高剂量组Nrf-2的表达显著增加(P<0.01)。结论:棒柄花叶在CCl4所致急性肝损伤小鼠中能减轻肝损伤,能改善小鼠肝功能水平,其机制可能通过调控凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2和Caspase-3)及Nrf2蛋白,抑制细胞凋亡和氧化应激水平、降低炎症因子水平来减轻肝损伤。这为肝损伤及相关疾病的机制研究及药物开发提供了潜在的依据。
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