【摘 要】
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目的:本研究的主要目的为探究长链非编码RNA（Long non-coding RNA,Lnc RNA）AC007637.1对结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）细胞增殖的影响,并探索其分子机制。方法:通过实时荧光定量逆转录PCR（Real time fluorescence quantitative reverse transcription PCR,q RT-PCR）检测AC0
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目的:本研究的主要目的为探究长链非编码RNA（Long non-coding RNA,Lnc RNA）AC007637.1对结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）细胞增殖的影响,并探索其分子机制。方法:通过实时荧光定量逆转录PCR（Real time fluorescence quantitative reverse transcription PCR,q RT-PCR）检测AC007637.1在CRC组织和细胞中的表达情况;采用CCK-8法和平板克隆形成实验来检测AC007637.1在体外对CRC细胞增殖的影响;采用裸鼠皮下成瘤实验研究AC007637.1对CRC细胞体内生长的影响;运用RNA pull down联合质谱分析筛选AC007637.1在CRC细胞中的结合蛋白,并运用Western Blot和RNA免疫共沉淀（RNA immunoprecipitation,RIP）等技术进一步验证AC007637.1与其靶蛋白的结合,探究AC007637.1在CRC中的分子机制。结果:AC007637.1在CRC肿瘤组织中的表达显著降低（P＜0.0001）,且AC007637.1的高表达与CRC病人的良好预后相关（P=0.009）;敲降AC007637.1促进CRC细胞的增殖及克隆形成,而过表达AC007637.1后CRC细胞的增殖和克隆形成能力则受到明显抑制;动物实验结果表明AC007637.1敲降促进体内CRC肿瘤生长,而AC007637.1过表达则抑制肿瘤生长;RNA pull down蛋白质谱分析确定了AC007637.1的三个靶蛋白-FXR1、Trim25和PCNA;沉默AC007637.1可以提高PCNA的蛋白表达水平,过表达AC007637.1可以降低PCNA的蛋白表达水平;AC007637.1显著缩短了PCNA的半衰期,降低了其蛋白稳定性;其机制为AC007637.1可通过促进E3泛素连接酶Trim25与PCNA的结合,进而增强Trim25对PCNA的泛素化修饰,促进PCNA降解;敲降FXR1可以提高AC007637.1的稳定性,降低PCNA蛋白水平,进而抑制CRC细胞的增殖。结论:AC007637.1可以显著抑制CRC细胞的增殖能力,是一个新的抑癌基因;AC007637.1可作为分子支架促进Trim25和PCNA的结合,进而增加PCNA的泛素化修饰和降解,最终抑制CRC的增殖。FXR1能够结合并降低AC007637.1的稳定性,进而影响其对PCNA蛋白的负调控。
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