川芎嗪对C5b-9诱导足细胞损伤的保护作用

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目的:观察川芎嗪对膜攻击复合物C5b-9介导的足细胞损伤的保护作用。方法:体外培养小鼠足细胞系MPC5,在33℃、γ干扰素存在条件下诱导其增殖;37℃、无γ干扰素条件下培养14天获得分化表型。以纯化的人补体C5b6和正常人血清提供C7~C9体外组装膜攻击复合物C5b-9,作用于培养足细胞,建立足细胞亚溶破模型,并以免疫荧光染色和LDH释放实验进行成模鉴定。免疫荧光染色分析膜攻击复合物C5b-9对足细胞骨架相关蛋白F-actin表达的影响以及C5b-9对足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达和分布的影响。流式细胞仪分析荧光探针DCFH-DA标记的细胞内ROS。MTT法检测川芎嗪对足细胞增殖的影响,确定川芎嗪干预剂量,观察川芎嗪对C5b-9损伤足细胞的干预作用。结果:LDH释放实验和免疫荧光染色显示足细胞亚溶破模型成功建立。亚溶解剂量的C5b-9可呈时间依赖性地破坏足细胞骨架结构,使细胞骨架纤维丧失丝状结构和极性,排列紊乱呈絮状。C5b-9能诱导足细胞内ROS的产生明显增加。延长C5b-9作用时间,有使足细胞相关蛋白nephrin的表达由沿细胞膜线性分布到转为胞质中分布的趋势,且nephrin表达强度减低。川芎嗪干预足细胞能维持细胞骨架纤维的结构和极性,保存细胞骨架形态。川芎嗪还能明显减少C5b-9引起的足细胞内ROS的产生,但川芎嗪对C5b-9所致nephrin的重分布及表达的变化没有明显恢复作用。结论:川芎嗪可以通过维持足细胞骨架形态和减少足细胞氧化应激而在补体介导的足细胞损伤中发挥其足细胞保护作用。
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