深海鱼油作为一种保健品已广泛受到人们的青睐,它对人体的作用主要体现在健脑益智、明目、预防和治疗心脑血管疾病、抗炎症、抗肿瘤、抑制过敏反应等方面。其主要功能因子二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)也为人们所熟知。EPA对人体的作用主要体现在预防和治疗心脑血管疾病上,而DHA则主要体现在健脑益智上。这两者对人体生理作用的侧重点不同,而目前市售的鱼油保健品都同时含有这二者,因此建立一套绿色的分离纯化工艺,分别将这二者从鱼油中分离出来,生产出更具有选择性的鱼油产品是十分必要的。目的本课题旨在建立一套分离纯化鱼油中二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的绿色工艺。并对快速分析检测鱼油保健品中二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的方法进行研究,以便对鱼油保健品生产工艺和产品质量进行监测。方法1、建立了一套气相色谱方法,对鱼油原料和工艺各环节产品中的二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的含量进行监测。恒定柱温240 ℃保持15 min、载气流速30 cm/sec、氢气流速50mL/min、空气流速400mL/min、进样口温度250 ℃、检测器温度250℃、分流比为10:1,进样量1 μL。2、对尿素包合法各个单因素进行考察,确定最佳尿素包合工艺,对鱼油中的二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯进行富集。将鱼油与尿素以1:3的比例混合,在55℃的尿素乙醇饱和溶液中反应0.5 h,然后自然冷却至室温,转移到0℃包合9 h。3、对分子蒸馏法各个单因素进行考察,通过正交试验,选取最优分子蒸馏工艺条件,对鱼油中的二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯先进行预分离,再进行二次蒸馏。二十碳五烯酸最佳分离工艺:蒸发温度80℃、冷凝温度15 ℃、刮板转数100r/min,压力5 Pa。二十二碳六烯酸乙酯的最佳分离工艺:蒸发温度90 ℃、冷凝温度20℃、刮板转数50r/min,压力5 Pa。结果1、在该色谱条件下,分别取1μL鱼油乙酯供试品溶液、二十碳五烯酸乙酯对照品溶液和二十二碳六烯酸乙酯对照品溶液进行GC检测,二十碳五烯酸乙酯保留时间在6.006min,二十二碳六烯酸乙酯保留时间在8.896 min,且与其他组分峰达到基线分离,满足分析检测要求。2、通过对尿素包合法富集鱼油中二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的各个单因素如脲酯比、反应温度、包和温度、包合时间等对富集效果影响的考察,发现反应温度对尿素包合反应的影响最大,脲酯比和包合时间对富集产品中二十碳五烯酸乙酯含量的影响大于对二十二碳六烯酸乙酯的影响。在最优工艺下一次性包合,可将二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的含量分别从17.0%和13.4%提高到54.2%和21.3%,总含量从30.4%提高到了 75.5%。3、对真空分子蒸馏富集鱼油中二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的各个单因素如预加热和脱气温度、蒸发温度、冷凝温度、刮板转数、压力、流速等对分离效果的影响进行考察,结果显示蒸发温度对整个分子蒸馏分离纯化影响最大,刮板转数和压力对产品在轻相和重相中的分配影响较大。在确定的二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯各自的最优工艺条件下,经过二次蒸馏二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的含量分别从36.2%和24.6%上升到51.8%和73.25%。结论1、本实验建立的气相色谱检测方法可以对鱼油及其产品中的二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯进行快速、准确定量,且溶剂消耗少,灵敏度高,重现性好。2、尿素包合法富集鱼油中的二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯成本低廉、操作简单,便于工业化生产。但是尿素包合法不能独立将鱼油中的二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯进行分离,只能对其进行一定程度的富集,因此只能作为一种粗提、前处理方法,要想得到更高纯度的二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯则需要靠与其他方法联用。3、真空分子蒸馏法是利用分子运动的平均自由程不同从而达到分离纯化目的的。全过程物料在高真空条件下进行分离,且不涉及任何有机溶剂,不失为一种理想的绿色分离技术。然而与尿素包合法相同,真空分子蒸馏亦不能对二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯进行高纯度的分离,也需要与其他方法连用才能得到高纯度的二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯。