论文部分内容阅读
目的：本课题拟以酯的形式将5-氟尿嘧啶与蛇葡萄素拼合成一系列新衍生物，通过过柱分离纯化，进行色谱、质谱、核磁共振、紫外、红外等检测方法对新衍生物进行结构鉴定。以体外培养人白血病细胞K562和K562/ADR为模型，用新合成的衍生物作受试药物，通过MTT法，研究新衍生物对K562和K562/ADR细胞生长增殖的影响及对K562/ADR耐药性的影响。其意义在于合成一系列同时具有5-氟尿嘧啶和蛇葡萄素优点的高活性低副作用的抗肿瘤药衍生物，为开发更多的新的抗肿瘤药衍生物提供研究资料和实验基础。
方法：①以氯乙酸为连接基团，用缩合剂将5-氟尿嘧啶与蛇葡萄素缩合成酯衍生物；通过过柱分离纯化，并进行色谱、质谱、核磁共振、紫外、红外等检测方法对新衍生物进行结构鉴定。②常规培养人白血病K562细胞株，以0.625μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L8个浓度水平的新衍生物分别作用24h、48 h和72 h，以不加药物为阴性对照组，MTT法检测细胞增殖抑制率，计算半数抑制浓度(IC50)，分析是否具有时间和浓度依赖性。同时，与阳性对照组48h的IC50进行比较。③常规培养人白血病K562/ADR耐药细胞株，以0.625μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L8个浓度水平的新衍生物作用48 h，以不加药物为阴性对照组，MTT法检测细胞增殖抑制率，计算IC50，分析是否具浓度依赖性。同时，与阳性对照组的48h的IC50进行比较。④MTT法筛选新衍生物对K562/ADR细胞低毒浓度，以筛选出的低毒浓度作为耐药逆转的实验浓度，检测新衍生物与阿霉素共用时，K562/ADR对阿霉素的敏感性，并以维拉帕米与阿霉素共用组作为增敏实验的对照。
结果：⑴经过柱分离纯化、结构鉴定确定合成2个全新的衍生物，分别是5，7-二羟基—4-氧代—2-(3，4，5-三羟基苯基)—3-(2-(5-氟—2，4-二氧代—3，4-二氢吡啶-1(2H))乙酯基)苯并二氢吡喃(A)和5，7-二羟基—4-氧代—2-(3，5-二羟基苯基—4-(2-(5-氟—2，4-二氧代—3，4-二氢吡啶-1(2H))乙酯基))—3-(2-(5-氟—2，4-二氧代—3，4-二氢吡啶-1(2H))乙酯基)苯并二氢吡喃(B)。⑵衍生物A对K562细胞具有增殖抑制作用，且呈明显的浓度和时间依赖性关系。24h、48h、72 h的IC50分别是(22.51±2.62)μmol/L、(11.62±2.20)μmol/L、(12.54±1.02)μmol/L。⑶衍生物B对K562细胞具有增殖抑制作用，且呈明显的浓度和时间依赖性关系。24h、48 h、72h的IC50分别是(21.51±1.84)μmol/L、(10.34±0.60)μmol/L、(11.11±1.48)μmol/L。⑷处理48 h，不同浓度的衍生物A对K562/ADR细胞具有不同的增殖抑制作用，呈明显的浓度依赖性关系。其IC50为(7.19±0.51)μmol/L，与其作用于非耐药细胞株K562的半数抑制浓度[IC50=(11.62±2.20)μmol/L]相比差异具有统计学意义(P<0.01)；与阿霉素作用于48h耐药细胞株K562/ADR的半数抑制浓度[IC50=(50.52±4.03)μmol/L]相比差异具有统计学意义(P<0.01)。⑸处理48h，不同浓度的衍生物B对K562/ADR细胞具有不同的增殖抑制作用，呈明显浓度依赖性关系。其IC50为(11.26±1.29)μmol/L，与阿霉素作用于48h耐药细胞株K562/ADR的半数抑制浓度相比[IC50=(50.52±4.03)μmol/L]差异具有统计学意义(P<0.01)。⑹衍生物A在低毒浓度范围内(0.625～1.25μmol/L)对K562/ADR细胞的耐阿霉素作用具有着部分的逆转作用，并存在浓度依赖性。当衍生物A的浓度为1.25μmol/L时，阿霉素对K562/ADR48h的IC50为(14.45±1.52)μmol/L；当A的浓度为0.625μmol/L时，阿霉素对K562/ADR48h的IC50为(17.94±1.09)μmol/L。两个浓度(0.625μmol/L与1.25μmol/L)衍生物A的逆转倍数分别为2.82和3.50。两个低毒浓度(0.625μmol/L与1.25μmol/L)的衍生物A联合ADR作用K562/ADR的IC50与单独ADR作用耐药细胞株K562/ADR半数抑制浓度[IC50=(50.52±4.03)μmol/L]相比差异具有统计学意义(P<0.01)。⑺衍生物B在低毒浓度范围内(0.625～1.25μmol/L)对K562/ADR细胞的耐阿霉素作用具有着部分的逆转作用，并存在浓度依赖性。当衍生物B的浓度为1.25μmol/L时，阿霉素对K562/ADR48h的IC50为(36.17±4.49)μmol/L；当衍生物B的浓度为0.625μmol/L时，阿霉素对K562/ADR48h的IC50为(48.89±8.30)μmol/L。两个浓度(0.625μmol/L与1.25μmol/L)衍生物B的逆转倍数分别为1.03和1.40。1.25μmol/L联合ADR作用K562/ADR的IC50与单独ADR作用耐药细胞株K562/ADR半数抑制浓度[IC50=(50.52±4.03)μmol/L]相比差异具有统计学意义(P<0.01)。
结论：①通过合成、分离纯化、鉴定获得2个5-氟尿嘧啶与蛇葡萄素的新的拼合衍生物。②两个新衍生物对细胞株K562都具有抑制作用，且呈浓度和时间依赖性。③两个新衍生物对细胞株K562/ADR都具有抑制作用，呈浓度依赖性。④低毒浓度的衍生物联合阿霉素作用于K562/ADR细胞，可以降低阿霉素对K562/ADR的半数抑制浓度，部分逆转K562/ADR的耐药性。