miR-451在膀胱癌侵袭转移中的作用机制研究及其靶基因预测

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:initial1985
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目的:通过检测mi R-451在膀胱癌组织和膀胱癌细胞中的表达,分析其与临床病理特征及转移潜能的相关性,以验证mi R-451是否为膀胱癌潜在的抑癌基因;体外实验探寻mi R-451对膀胱癌细胞粘附、二维迁移及侵袭能力的影响,阐明它在膀胱癌侵袭转移中的作用机制,并预测mi R-451的可能下游靶基因。方法:收集自2011年1月至2014年12月间我院行根治性全膀胱切除术后的临床标本30例,采用q RT-PCR检测mi R-451在膀胱癌组织、癌旁组织及正常膀胱组织中的表达,分析其与临床病理特征的相关性;检测膀胱癌细胞T24、5637、J82中mi R-451的表达,分析其与细胞转移潜能的相关性。构建mi R-451过表达的细胞模型,采用粘附实验、划痕实验、Transwell实验探寻mi R-451对膀胱癌细胞粘附、二维迁移及侵袭能力的影响,并通过Target Scan、mir Base等生物信息学软件预测、筛选mi R-451的可能下游靶基因。结果:1、基因表达检测结果显示:①mi R-451在膀胱癌组织中较癌旁及正常膀胱组织中显著低表达(P<0.05);mi R-451在癌旁组织中较正常膀胱组织中显著低表达(P<0.05)。②mi R-451在高分期(T3、T4)的膀胱癌组织中较在低分期(如T1、T2)膀胱癌组织中显著低表达(P<0.05);mi R-451在高分化膀胱癌组织中较在低分化膀胱癌组织中显著高表达(P<0.05)。③mi R-451在J82中较在T24、5637中高表达,且其表达水平与细胞株转移潜能负相关(P<0.05)。2、①转染效率检测提示mi R-451mimics及scramble序列在三个转染细胞组中的转染效率都达90%以上,转染效果好,符合后续实验要求。②粘附实验结果显示:mi R-451过表达组较阴性对照组及空白对照组细胞OD值低(P<0.05),而阴性对照组及空白对照组差异不显著(P>0.05);说明mi R-451过表达可减弱膀胱癌细胞的粘附能力。③划痕实验结果显示:mi R-451过表达组较阴性对照组及空白对照组细胞迁移距离短(P<0.05),而阴性对照组及空白对照组差异不显著(P>0.05);说明mi R-451过表达可减弱膀胱癌细胞的二维迁移能力。④Transwell实验结果显示:mi R-451过表达组较阴性对照组及空白对照组侵袭细胞总数少(P<0.05),而阴性对照组及空白对照组差异不显著(P>0.05);说明mi R-451过表达可减弱膀胱肿瘤细胞的侵袭能力。3、预测mi R-451可能的下游靶基因为CAB39、MIF、RAB14、ABCB1等。结论:1、mi R-451在膀胱癌组织及癌旁组织较在正常膀胱组织中显著低表达,提示mi R-451可能与膀胱癌的发生、演变及进展密切相关,有可能为膀胱癌的早期诊断及其分子靶向治疗提供新的切入点。2、mi R-451的表达水平和膀胱癌临床分期及病理分级呈负相关,有可能成为膀胱癌新的预后指标。3、mi R-451的过表达可减弱膀胱癌细胞的粘附、二维迁移及侵袭能力。4、生物学信息软件分析并预测mi R-451的可能下游靶基因是CAB39、MIF、RAB14、ABCB1等,可为膀胱癌靶向分子相关研究提供新的切入点。
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