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目的肺癌是世界范围内常见的恶性肿瘤,其发病率死亡率都居于首位。目前肺癌患者的5年生存率仍较低,仅为15%左右。肺癌的病因机制复杂,既有遗传因素的参与,又具有表观遗传因素的调控。microRNA是一类小分子RNA,虽不能编码蛋白,却可以参与基因表达的转录后调控。对microRNA及其调控的靶基因的研究有助于我们探寻肺癌新的诊断及治疗靶点。miR-23b是我们前期通过microRNA表达谱筛选出来的在女性非吸烟肺腺癌血浆中差异表达的miRNA,我们推测其在肺腺癌的发生发展中发挥着一定的作用。本研究通过生物信息学预测并经双荧光素酶报告基因验证发现mi R-23b的作用靶点SET8;细胞功能实验来初步探索miR23b对肺腺癌发生发展影响的作用机制;在人群水平上研究靶点SET8的表达及对肺腺癌生存及预后影响,以期筛选肺腺癌诊断及治疗的靶点,为探索肺腺癌靶向治疗提供依据。方法1、通过生物信息学筛选miR-23b的作用靶点,并通过荧光素酶报告基因实验验证SET8为miR-23b的作用靶点及作用关系;选取肺腺癌细胞系A549、H1299进行细胞功能实验,通过MTT细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞迁移实验及细胞侵袭实验来验证过表达miR-23b对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,证实miR-23b靶向SET8对肺腺癌的调控作用。2、选取天津医科大学肿瘤医院收集的手术切除的肺腺癌患者140例及80例配对的正常组织,并制作成组织芯片(TMA),通过免疫组织化学染色研究miR-23b的作用靶点SET8在肺腺癌中的表达情况。通过查阅病历收集患者临床信息,电话随访获得生存情况,分析SET8的表达对肺腺癌患者的发病及预后影响。SET8在肺腺癌中的表达采用Wlicoxon配对检验分析,生存分析采用Log-rank检验及多因素Cox回归分析。结果1、miR-23b在肺腺癌肿瘤组织中的表达显著低于配对的癌旁组织,差别具有统计学意义(P≤0.001)。与我们前期观察到的miR-23b在女性非吸烟肺腺癌血浆中表达趋势一致,因此我们认为其可能是肺腺癌的抑制基因。2、双荧光素酶报告基因结果显示,在肺腺癌中miR-23b与SET8具有两段结合序列,miR-23b能够从mRNA及蛋白水平上负调控SET8在肺腺癌中的表达。miR-23b能够抑制肺腺癌细胞增殖、调控细胞周期、抑制细胞迁移与侵袭。3、在肺腺癌中SET8蛋白的表达水平上调(P≤0.001),是潜在的促癌基因。SET8的表达与各临床病理特征未见相关性。生存分析结果显示,肺腺癌中SET8高表达者预后不良,差异具有统计学意义(OS:P=0.025;DFS:P=0.020)。分层结果显示,SET8蛋白高表达在男性、无肺部疾病史、无肿瘤家族史、肿瘤浸润早期、无淋巴结转移、无远处转移患者中预后较差。Cox多因素回归分析发现在肺腺癌中SET8高表达可能是独立的危险因素。结论miR-23b在肺腺癌中靶向调控基因SET8的表达,发挥着抑癌基因的作用。SET8作为受mi R-23b调控的促癌基因,其在肺腺癌中的表达水平与肺腺癌的发病及预后相关,其高表达可能为独立的预后危险因素。其作用机制仍需进一步探索。