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研究背景心血管疾病发生率高致死率高,且有年轻化的趋势,严重威胁人类的生命安全。在心血管疾病中缺血性心脏病致死率是最高的。在缺血性心脏病中最难解决的就是当缺血的心肌组织恢复血流供应带来的再灌注损伤,这被称之为心肌缺血再灌注损伤（Myocardial ischemia/reperfusion injury,MI/RI）。目前对MI/RI的治疗是经皮冠状动脉介入治疗和相关溶栓药物的使用,但MI/RI在世界上仍然是一种死亡率很高的疾病。中药治疗MI/RI不但历史悠久且疗效显著。如附子干姜配伍就是常用于治疗MI/RI的中药,但其治疗MI/RI的潜在活性成分和潜在治疗机制尚不清楚。网络药理学是用于分析中药多成分,多靶点,多通路的重要工具。因此本研究拟通过网络药理学预测附子干姜抗MI/RI的潜在活性成分和潜在治疗机制,并通过体内和体外实验验证网络药理学的预测结果。目的1.网络药理学预测附子干姜抗MI/RI的机制。2.附子干姜配伍对大鼠血管内皮细胞细胞缺氧/复氧损伤保护作用研究。3.附子干姜配伍减轻MI/RI大鼠心肌损伤机制研究。方法1.在传统中药药理数据库中,根据口服生物利用度（oral bioavailability,OB）和类药性（drug-like quality,DL）筛选附子和干姜的活性成分。通过查阅相关文献补充附子干姜中关键化合物。利用STRING数据库获取治疗靶点的PPI网络,DAVID数据库用于GO富集分析（Gene ontology,GO）和KEGG通路分析（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）。Cytoscape3.8.0软件用来绘制成分-靶点图,成分-靶点-通路图。2.缺氧/复氧（Hypoxia/reoxygenation H/R）损伤模型用于体外研究。1.20只大鼠随机被分为四组,空白组,附子干姜含药血清低剂量组（1.4g/kg）,附子干姜含药血清中剂量组（2.8g/kg）,附子干姜含药血清高剂量组（5.6 g/kg）。连续灌胃一周,每天两次,于末次给药2小时后取含药血清,在56℃灭活后保存于-80℃冰箱,用于细胞培养。2.CCK8法用于检测H/R对大鼠主动脉血管内皮细胞（Rat aortic vascular endothelial cells RAVEC）存活率的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测附子干姜对被H/R损伤的RAVEC细胞凋亡率的影响。3.试剂盒SOD,MDA观察附子干姜对H/R损伤的RAVEC细胞氧化损伤的影响。4.Western Blotting（WB）用于检测HIF-1α、VEGF、e NOS的表达。3.大鼠心脏左前降支结扎模型用于体内研究。1.60只大鼠随机分为6组,假手术组,模型组,复方丹参滴丸组（0.09 g/kg）,附子干姜低剂量组（1.4 g/kg）,附子干姜中剂量组（2.8 g/kg）,附子干姜高剂量组（5.6 g/kg）,每组10只。2.给药6天后造模,取心脏和血管组织观察附子干姜对心肌和血管组织的病理损伤及心肌组织梗死面积的影响。3取血清检测SOD,MDA氧化损伤指标。4.WB检测大鼠血管中HIF-1α、VEGF、e NOS的表达。结果1.通过关键化合物的补充及TCMSP数据库的筛选,共搜集到附子干姜中的活性成分16个。根据度值排名,乌头碱,新乌头碱,次乌头碱,6-姜辣素被确定为附子干姜抗MI/RI的潜在活性成分。PPI网络分析确定了AKT1、IL6、TNF、MAPK3、TP53为核心靶点。GO分析发现附子干姜抗MI/RI的生物过程主要为凋亡,炎症,NO的正调控。KEGG分析发现附子干姜抗MI/RI的潜在通路为PI3K-Akt signaling pathway、TNF signaling pathway、HIF-1 signaling pathway、Thyroid hormone signaling pathway、Apoptosis、MAPK signaling pathway、Neurotrophin signaling pathway、c AMP signaling pathway、Estrogen signaling pathway、Toll-like receptor signaling pathway。2.附子干姜含药血清可提高H/R损伤的RAVEC细胞的存活率和凋亡率,在给药组中,附子干姜含药血清中剂量组的治疗效果最好（2.8 g/kg）。试剂盒检测结果表明附子干姜含药血清可降低H/R损伤的RAVEC细胞的氧化损伤,SOD的表达增加,MDA的表达降低,其中附子干姜含药血清中剂量组的治疗效果最好（2.8 g/kg）。WB结果表明附子干姜可显著提高H/R损伤的RAVEC细胞的HIF-1α、VEGF、e NOS的表达。3.体内研究发现附子干姜可显著降低大鼠心肌梗死面积,心脏和血管的病理损伤程度减轻,在给药组中除复方丹参滴丸（compound danshen dripping pills,CDDP）组外附子干姜高剂量组（5.6 g/kg）治疗效果最好。血液生化结果表明附子干姜可降低MI/RI大鼠的氧化损伤。相比模型组,给药组血清中SOD显著升高,MDA表达显著降低。WB结果表明附子干姜可使MI/RI大鼠血管中HIF-1α,VEGF,e NOS的表达显著提高。正如网络药理学的预测,附子干姜可通过激活HIF-1α信号通路,减少心肌细胞的氧化损伤和促进血管内皮细胞增殖和血管舒张发挥其抗MI/RI的效果。结论1.附子干姜抗MI/RI可能是通过PI3K-AKT信号通路,TNF信号通路,HIF-1α信号通路减少心肌细胞的凋亡、炎性损伤、缺氧损伤、调节血管收缩/舒张发挥治疗作用。2.附子干姜对H/R损伤的RAVEC细胞具有保护作用,可能是通过激活HIF-1α信号通路,减少其氧化损伤和凋亡率发挥保护作用。3.附子干姜可能通过激活HIF-1α信号通路,减少氧化损伤,促进NO和VEGF的释放以达到血管舒张和血管内皮细胞增殖发挥抗MI/RI的作用。