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糖尿病(DM)是一类最常见的综合征,是由于代谢的紊乱而引起的,其特征主要为高血糖和血脂异常。糖尿病主要分为以下两种类型:1型糖尿病,它是胰岛素依赖型糖尿病,得病人群多为青少年;2型糖尿病,源于人体无法有效的利用胰岛素,即:非胰岛素依赖型糖尿病,得病人群多为成年人。截止到目前为止,大约有20万人以上被正式确认患有糖尿病,其中2型糖尿病的人数占80%-90%。目前为止,重要的治疗药物开发靶标是蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs),将其作为治疗药物研发的目标。PTP的作用机制:通过去磷酸化催化机制调节细胞中的不同酶。大多数的的PTP与2型糖尿病有着密切的联系,例如SHP-1,PTP1B,在调节胰岛素信号传导中起着关键的抑制作用,因此备受关注。丁香(Clove)(桃金娘科蒲桃属植物丁香的花蕾),是一味食药两用的中药,丁香可以起到杀菌、抗凝血的作用。在本论文中,首先我们分离纯化SHP-1的催化结构域△SHP-1及PTP1B的催化结构域△PTP1B,然后对160种中药进行筛选,筛选出对SHP-1、PTP1B的抑制率>90%的中药--丁香。并且检测了丁香水提液对SHP-1、PTP1B的抑制效果,结果发现丁香水提液对这两种PTPs均具有抑制作用,IC50值分别是9.2,50.9μg/ml,确定丁香水提液是SHP-1的非竞争性抑制剂、PTP1B的非竞争性抑制剂。进一步的对丁香进行研究,通过质谱的方法筛选出其中对SHP-1酶活起作用的有效成分为单体A。用同样的方法分析单体A对SHP-1,PTP1B的活性,研究单体A的抑制作用是否具有选择性,单体A有效地抑制SHP-1,PTP1B,其IC50分别为70.3±1.5,489.6±1.3μM,单体A对SHP-1的抑制类型为竞争性抑制剂,抑制常数为98.8μM,单体A对PTP1B的抑制类型为竞争性抑制剂,抑制常数为170.9μM。最后,将丁香水提液对胰岛素信号通路的影响进行实验,发现丁香水提液可以显著的增强HepG2细胞中的胰岛素受体IR、细胞外调节激酶ERK的磷酸化水平和总蛋白的磷酸化水平,并用同样的方法检测了单体A对胰岛素信号通路中IR,IRS,ERK几种关键细胞蛋白的酪氨酸磷酸化水平的影响。实验结果表明,单体A可以增加IR、IRS、ERK的酪氨酸磷酸化水平,是引起胰岛素信号级联的早期步骤;并且单体A还以以剂量依赖的方式促进HepG2细胞中IR和IRS的磷酸化。说明丁香及其主要成分单体A很有可能通过抑制酪氨酸磷酸酶SHP-1与PTP1B的活性,进而激活胰岛素信号通路,从而对2型糖尿病起到一定的治疗作用。