中药薄荷抗呼吸道合胞病毒有效部位及作用机制研究

来源 :山东中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangluochg
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目的:在细胞水平下,通过抗病毒实验,筛选薄荷抗呼吸道合胞病毒的最佳提取方法;其次分离、纯化薄荷抗病毒有效部位,并进行理化鉴定。初步探究薄荷抗病毒作用机制,最后通过建立动物感染模型,研究薄荷有效部位体内抗病毒的药理活性和病毒感染后薄荷的抗炎机制。方法:本研究首先采用蒸馏水、乙醇、乙酸乙酯三种不同溶剂对薄荷进行提取,并对薄荷水提物进行醇沉,在细胞水平下,通过显微镜观察细胞病变效应(CPE),用噻唑蓝(MTT)法染色,酶标仪测定吸光度值,通过比较治疗指数(TI),确定薄荷最佳提取方法;其次采用截流分子量为10K、5K、3K的三种超滤膜对有效部位进行超滤,筛选抗病毒效果最佳的分子量部位;根据相似相溶原理,选择蒸馏水、体积分数为25%、50%、75%的乙醇作为洗脱剂冲洗D-101、X-5、HPD-100、AB-8、NKA-9五种不同极性的大孔吸附树脂柱,筛选分离纯化效果最好的大孔吸附树脂和抗病毒效果最佳的洗脱剂,然后用筛选所得大孔吸附树脂进一步分离纯化薄荷有效部位,并对有效部位进行理化鉴定;然后将有效部位以不同的给药方式与细胞共同培养,研究薄荷抗RSV的作用机理;建立动物感染模型,研究薄荷有效部位在小鼠体内的抗病毒活性;最后采用3种试剂盒探究RSV感染后薄荷的免疫机制。结果:实验结果显示,薄荷水提醇沉后上清液部位对RSV的抑制作用最强,作用最稳定,抑毒指数为20.74;分别经截流分子量为10K、5K、3K的超滤柱超滤后分子量5K-10K的部位超滤液抗RSV效果最佳;HPD-100型大孔吸附树脂对薄荷的分离纯化效果最好,25%体积分数的乙醇洗脱液抗病毒作用最佳;体内抗病毒实验表明,薄荷纯化物可明显改善RSV感染小鼠的症状,并减少病毒对肺的损伤。结论:在体外抗病毒实验中以抑毒指数为指标,确立了薄荷的最佳提取方法,通过超滤、大孔吸附树脂分离得到其抗RSV的有效部位,经药理实验证明其具有体内抗病毒活性,初步探究了体外作用机制及病毒感染后的的免疫机制。
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