前列腺癌(PCa)发病率逐年升高,是西方国家最常见的恶性肿瘤之一,在男性癌症死亡率中占第二、三位。近年来我国前列腺癌的发病率也迅速提高。在治疗过程中起先对内分泌治疗有效的雄激素依赖性前列腺癌细胞也会慢慢的转变成雄激素非依赖性的细胞,而雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)的肿瘤细胞对内分泌治疗无效或效果较差,从而导致内分泌治疗失败。雄激素非依赖性前列腺癌还可向远处转移,对各种放化疗也缺乏可靠的疗效,往往预后较差,也称作激素难治性前列腺癌。对激素非依赖性前列腺癌目前尚缺乏持续有效的治疗方法,仍是一个世界性的难题。近年来的体外和体内实验研究证明中草药方剂对治疗多种肿瘤具有良好的效果。因此,中草药成为开发治疗非激素依赖性前列腺癌新药物的良好选择。药理实验证明,冬凌草甲素具有较强的抗肿瘤活性,临床上用于食管癌、胃癌、肝癌的治疗,取得了一定的疗效。冬凌草甲素对EAC、HAC、S180、P388及L1210等多种移植性肿瘤均具有明显的抑制作用。我们以前已经报道了含有冬凌草的复方植物制剂PC-SPESⅡ对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株和裸鼠移植瘤的作用,表明其对雄激素非依赖型前列腺癌细胞株和裸鼠移植瘤的具有抑制作用,证实PC-SPESⅡ具有抑制前列腺癌细胞生长和促进前列腺癌细胞凋亡的作用。而冬凌草是PC-SPESⅡ配方中的主要成分。因此,我推测冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌应该具有抑制作用,而且研究单体成分与复方制剂比较更容易阐明其机理,故我拟用高纯度的冬凌草甲素喂饲雄激素非依赖性前列腺癌移植瘤的裸鼠这一动物实验,检测其对肿瘤生长的抑制情况,检测肿瘤细胞周期相关蛋白、凋亡及凋亡相关蛋白、免疫逃逸相关蛋白的改变,以及IL-6、NF-kB的变化。综上所述,前列腺癌发病率逐年升高,病情进展到AIPCa治疗十分困难,急需研究治疗雄激素非依赖性前列腺癌的有效的治疗方法,但目前国内外研究进展缓慢。冬凌草甲素具有良好的抗肿瘤活性,可望成为有效治疗AIPCa的新手段。本课题应用冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制及其机制的动物实验的研究,可以为将来临床上推广应用冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌患者进行治疗提供有力的依据和基础。全文共分二个部分第一部分冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用目的:观察冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)DU145裸鼠移植瘤的抑制疗效。方法:雄性BALB/c-nude裸小鼠20只,皮下接种DU145细胞,随机分成两组,一组为对照组,喂饲生理盐水,一组为冬凌草甲素用药组,喂饲冬凌草甲素15mg/kg/d。从接种第二天起开始喂饲,共7周。每周观察肿瘤生长情况,测量肿瘤三径(mm),根据体积(V=L×W×H×π/6)变化绘制肿瘤生长曲线。结果:7周后对照组和用药组肿瘤体积平均值分别为163.69±58.73 mm~3及68.55±29.37 mm~3(P＜0.05),可见用药后肿瘤的生长明显受抑,生长抑制率达到了58.12%。结论:冬凌草甲素可以显著抑制DU145肿瘤的生长,提示该药对AIPCa有抗癌活性。第二部分冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌的抑制机制的研究目的:研究冬凌草甲素作用于AIPCa裸鼠移植瘤后的细胞周期蛋白、凋亡相关蛋白和免疫逃逸相关因子等的影响,探讨冬凌草甲素对AIPCa肿瘤细胞的调控作用的机理。方法:对照组及用药组在7周后均处死,取下肿瘤组织,用逆转录PCR法检测细胞周期的负向调控因子P16和P21、促凋亡基因Bax、抑凋亡基因Bcl-2、细胞增殖转化相关因子IL-6、核转录因子NF-kB、免疫逃逸相关因子IDO的表达水平,对比两组之间的差异。结果:用药后各种基因的相对浓度平均值变化:P16的表达从0.46上升至0.95(P＜0.05),上升106.5%;P21从0.12上升至0.48(P＞0.05);Bax从0.24上升至0.38(P＜0.05),上升58.3%;Bcl-2从0.13上升至0.45(P＜0.05),上升246.2%;IL-6从0.33下降至0.02(P＜0.05),下降93.9%;NF-kB从0.73下降至0.19(P＞0.05);IDO从0.08下降至0.00(P＜0.01),下降100.0%。七种被测基因中P16、Bax、Bcl-2用药组较对照组升高,IL-6、IDO用药组较对照组降低,均有统计学意义。P21和NF-kB无统计学意义。结论:冬凌草甲素可能是通过阻滞细胞周期、减少分泌、抑制分化和增殖、降低免疫逃逸等来抑制AIPCa细胞的生长。