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背景与目的非小细胞肺癌是我国常见的一种恶性肿瘤,部分患者出现化疗药物耐药性导致患者治疗效果降低,非小细胞肺癌顺铂耐药性分子机制尚未阐明,环状RNA（circRNA）具有稳定性、组织特异性与高度保守性,并可充当微小RNA（miRNA）的海绵分子而发挥癌基因或抑癌基因作用。circLDB2在非小细胞肺癌中表达下调,上调其表达可抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及促进细胞凋亡进而增强非小细胞肺癌细胞顺铂敏感性。但circLDB2在非小细胞肺癌发生发展及顺铂敏感性中的作用机制尚未完全阐明。starBase、circinteractome预测显示circLDB2与miR-346存在结合位点。抑制miR-346表达可抑制非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭及促进细胞凋亡。starBase预测显示miR-346与含LIM调宁蛋白同源域蛋白1(（LIMCH1）存在结合位点。但circLDB2/miR-346/LIMCH1轴在非小细胞肺癌发生发展及顺铂敏感性中的作用机制尚未阐明。本研究主要分为五部分:第一部分circLDB2与非小细胞肺癌临床指标的相关性;第二部分circLDB2在非小细胞肺癌细胞中表达与鉴定;第三部分circLDB2在非小细胞肺癌细胞中的生物学功能研究;第四部分circLDB2在非小细胞肺癌细胞中的分子机制功能研究;第五部分动物实验验证circLDB2的功能。第一部分circLDB2与非小细胞肺癌临床指标的相关性方法采用qRT-PCR法检测circLDB2在非小细胞肺癌组织及细胞系中的表达量;根据肿瘤分期Ⅰ期15例、Ⅱ期14例、Ⅲ期24例,淋巴结未转移27例、淋巴结转移26例。结果1.与癌旁组织比较,非小细胞肺癌组织中circLDB2的表达量降低（P＜0.05）;2.与Ⅰ期比较,Ⅱ期与Ⅲ期患者中circLDB2的表达量降低,且随着肿瘤分期的增加而明显降低（P＜0.05）;3.与淋巴结未转移患者比较,淋巴结转移患者中circLDB2的表达量降低（P＜0.05）。第二部分circLDB2在非小细胞肺癌细胞中表达与鉴定方法采用qRT-PCR法检测circLDB2在人支气管上皮样细胞16HBE、人非小细胞肺癌细胞A549、H460中的表达量;oligo（dT）18与Divergent PCR法检测circLDB2的结构;RNase R实验与放线菌素D实验检测circLDB2的环状结构是否具有稳定性;RNA核浆分离实验检测circLDB2在细胞中的定位。结果1.与人支气管上皮样细胞16HBE比较,人非小细胞肺癌细胞A549、H460中circLDB2的表达量降低（P＜0.05）;2.oligo（dT）18与Divergent PCR法证实circLDB2的结构是环状结构;3.RNase R实验与放线菌素D实验证实circLDB2的环状结构具有稳定性;4.RNA核浆分离实验证实circLDB2主要集中在细胞质中发挥作用。第三部分circLDB2在非小细胞肺癌细胞中的生物学功能研究方法Vector、circLDB2过表达载体分别转染至A549、H460细胞,分别记为Vector组、circLDB2组;采用CCK-8、平板克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、细胞凋亡率、迁移及侵袭;CCK-8法检测顺铂IC50值。结果与Vector组比较,circLDB2组细胞活力、划痕愈合率和顺铂IC50值降低（P＜0.05）,克隆形成数和侵袭细胞数减少（P＜0.05）,细胞凋亡率和p53、PUMA蛋白水平升高（P＜0.05）。第四部分circLDB2在非小细胞肺癌细胞中的分子机制功能研究方法采用qRT-PCR、Western blot法分别检测miR-346和LIMCH1的表达量;免疫组化法检测癌旁组织、非小细胞肺癌组织中LIMCH1蛋白表达阳性率;RIP实验、双荧光素酶报告实验与RNA-pull down实验检测circLDB2与miR-346的靶向关系,双荧光素酶报告实验检测miR-346与LIMCH1的靶向关系;实验分组:Vector+miR-NC 组、circLDB2+miR-NC 组、circLDB2+miR-346 组、anti-NC+sh-NC 组、anti-miR-346+sh-NC 组、anti-miR-346+sh-LIMCH1 组;采用CCK-8、平板克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、细胞凋亡率、迁移及侵袭;CCK-8法检测顺铂IC50值。结果1.非小细胞肺癌组织和细胞系中miR-346的表达量升高（P＜0.05）,LIMCH1的表达量降低（P＜0.05）,其表达量与肿瘤分期增加及淋巴结转移有关;2.circLDB2与miR-346存在靶向结合关系,LIMCH1是miR-346的靶基因;3.与Vector+miR-NC组比较,circLDB2+miR-NC组细胞活力、划痕愈合率和顺铂IC50值降低（P＜0.05）,克隆形成数和侵袭细胞数减少（P＜0.05）,细胞凋亡率和 p53、PUMA、Bax、Cleaved Caspase-3 蛋白水平升高（P＜0.05）,Bcl-2蛋白水平降低（P＜0.05）;4.与circLDB2+miR-NC组比较,circLDB2+miR-346组细胞活力、划痕愈合率和顺铂IC50值升高（P＜0.05）,克隆形成数和侵袭细胞数增多（P＜0.05）,细胞凋亡率和p53、PUMA、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平降低（P＜0.05）,Bcl-2蛋白水平升高（P＜0.05）;5.circLDB2可通过负向调控miR-346的表达而正向调控LIMCH1的表达;6.与anti-NC+sh-NC组比较,anti-miR-346+sh-NC组细胞活力、划痕愈合率和顺铂IC50值降低（P＜0.05）,细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少（P＜0.05）,细胞凋亡率和p53、PUMA、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平升高（P＜0.05）,Bcl-2蛋白水平降低（P＜0.05）;7.与 anti-miR-346+sh-NC 组比较,anti-miR-346+sh-LIMCH1 组细胞活力、划痕愈合率和顺铂IC50值升高（P＜0.05）,细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多（P＜0.05）,细胞凋亡率和p53、PUMA、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平降低（P＜0.05）,Bcl-2 蛋白水平升高（P＜0.05）。第五部分动物实验验证circLDB2的功能方法将分别稳定转染Vector和circLDB2过表达载体的A549细胞皮下注射入裸鼠背部右侧,实验分组:Vector 组、cisplatin+Vector 组、cisplatin+circLDB2 组,每组5只,药物处理28天后取出,称量移植瘤重量及体积;采用Western blot法检测移植瘤组织中LIMCH1、p53、PUMA蛋白水平。结果1.与Vector组比较,cisplatin+Vector组移植瘤体积及重量减小（P＜0.05）,LIMCH1、p53、PUMA 蛋白水平升高（P＜0.05）;2.与cisplatin+Vector组比较,cisplatin+circLDB2组移植瘤体积及重量减小（P＜0.05）,LIMCH1、p53、PUMA 蛋白水平升高（P＜0.05）。结论circLDB2过表达可通过靶向调控miR-346表达而促进LIMCH1表达从而抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移及侵袭,并可诱导细胞凋亡,还可增加非小细胞肺癌细胞顺铂敏感性。