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目的:通过检测不同浓度的葡萄糖对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)胶原吞噬作用,以及尿激酶型纤溶酶原激活剂受体相关蛋白(uPARAP)mRNA表达的影响,探讨糖尿病患者牙周组织胶原过度降解的病理生理机制。方法:1.体外培养正常人牙周膜细胞HPDLF,以含不同浓度葡萄糖(5,10,15,20,25,30mmol/L)和甘露醇(5,10,15,20,25mmol/L)的条件培养基分别孵育6,12,24,48h后,采用MTT法检测HPDLF增殖水平。2.以鼠尾胶原包被荧光微球,细胞:微球=1:4比例将已制备好的胶原微球溶液分别加入各实验组细胞内,置于培养箱避光孵育特定的吞噬时间并进行吞噬实验,荧光显微镜及透射电镜下检测吞噬情况。3.不同浓度的葡萄糖(5,10,15,20,25,30mmol/L)和甘露醇(5,10,15,20,25mmol/L)分别作用HPDLF 6,12,24,48h后,采用流式细胞仪检测HPDLF 0.5,1,2,4h的胶原吞噬率。4.采用Real-time PCR法检测不同浓度葡萄糖(5,10,15,20,25,30mmol/L)和甘露醇(5,10,15,20,25mmol/L)作用于HPDLF24小时后,HPDLF的uPARAP mRNA表达水平。结果:1.浓度为10,15,20,25,30mmol/L的葡萄糖作用于HPDLF 6h后,HPDLF均显著增殖(p＜0.05),其中20mmol/L的葡萄糖作用12h时后,HPDLF增殖最为显著(p＜0.05);而甘露醇组对细胞增殖的影响与生理浓度葡萄糖组无统计学差异(p＞0.05)。2.不同浓度葡萄糖作用不同时间后吞噬实验结果显示,20mmol/l葡萄糖作用12h可刺激HPDLF胶原吞噬率增高,24h后达到峰值,48小时逐渐下降,但仍高于正常细胞吞噬率(p＜0.05)。当10,15,20,25,30mmol/L浓度的葡萄糖分别作用24h后,HPDLF在各吞噬时间段(0.5,1,2,4h)吞噬率显示:各实验组的吞噬率均随吞噬时间的延长而逐渐增高(p＜0.05);不同浓度的葡萄糖均能刺激胶原吞噬活性,在10mmol/l浓度时既能促进胶原吞噬,20mmol/l浓度作用的HPDLF吞噬率最高,促进作用最强(p＜0.05);在高浓度时吞噬率有所下降,浓度越高下降越明显(p＜0.05)。甘露醇组的吞噬结果与生理浓度葡萄糖5mmol/l的结果无明显统计学差异(p＞0.05)。3.不同浓度(5,10,15,20,25,30mmol/L)葡萄糖作用24h均能使HPDLF的uPARAP表达上调(p＜0.05);表达量在20mmol/l浓度时达到最高,而后随浓度升高表达量逐渐下降,但仍高于正常组(p＜0.05)。甘露醇组的实验结果与正常组无明显统计学差异(p＞0.05)。结论:1.高浓度葡萄糖能够显著增强HPDLF的胶原吞噬功能,这可能是糖尿病患者牙周组织胶原过度降解的病理生理机制之一。2.高浓度葡萄糖能够上调HPDLF的uPARAP mRNA表达水平,推测高糖是使HPDLF胶原吞噬作用亢进的作用机制之一。