Sparc对瘢痕疙瘩成纤维细胞以及正常皮肤成纤维细胞增殖凋亡及Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌影响的研究

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xuezhenlong0310
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目的本研究旨在从细胞层面探究Sparc蛋白对人瘢痕疙瘩成纤维细胞以及正常皮肤成纤维细胞增殖与凋亡的影响,以及其对两种细胞Ⅰ胶原与Ⅲ型胶原表达的影响,从而证实Sparc蛋白在瘢痕疙瘩形成中的重要作用。方法收集手术切取的瘢痕疙瘩十例以及正常皮肤五例,分别进行组织块分离培养,获得两种类型的原代细胞后继续传代,待细胞呈对数增长期时,显微镜下观察细胞状态,进行后续加药处理。将两种类型的细胞分别分为实验组与对照组,实验组加入含2μg/ml重组人Sparc蛋白的培养基孵育72小时,对照组加入等量培养基孵育相同时间,应用CCK-8细胞增殖实验检测Sparc蛋白对各实验组细胞增殖的影响,流式细胞实验检测Sparc蛋白对各组细胞凋亡的影响,蛋白印迹实验与实时逆转录聚合酶链反应检测各组细胞Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原的表达。结果1.CCK-8细胞增殖实验提示加入Sparc蛋白处理的各实验组较对照组细胞增殖更明显;2.流式细胞实验提示加入Sparc蛋白实验组细胞凋亡较对照组存在抑制现象;3.蛋白印迹实验提示加入Sparc蛋白实验组Ⅰ型胶原的表达较对照组存在增高,瘢痕疙瘩成纤维细胞实验组Ⅲ型胶原的表达较对照组也有增高,但是正常皮肤成纤维细胞实验组Ⅲ型胶原的表达与对照组相比增高不显著。4.实时逆转录聚合酶链反应提示Sparc蛋白各实验组Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原的表达较对照组均存在增高。结论Sparc蛋白可以显著促进各组细胞的增殖,抑制其凋亡,Sparc蛋白可以显著促进各组细胞Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原的表达。本次实验进一步证实了Sparc蛋白可能在瘢痕疙瘩的生成中扮演着重要角色,或许可以作为瘢痕疙瘩治疗中的新靶点。
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