番茄细胞壁蔗糖转化酶抑制蛋白(Le-INVINH1)在植株抵抗低温胁迫中的功能研究

来源 :华中师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lin_yuqi
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细胞壁蔗糖转化酶抑制蛋白是一种分子量小于25KD的小分子蛋白,它能够在翻译后水平调控蔗糖转化酶的活性。有研究表明改变细胞壁蔗糖转化酶抑制蛋白的表达能够调节细胞壁蔗糖转化酶的活性,进而影响果实和种子的发育。在番茄细胞壁蔗糖转化酶抑制蛋白的研究中,已有研究证实改变细胞壁蔗糖转化酶抑制蛋白的表达水平影响了番茄果实及种子的发育,但对其在番茄抵抗胁迫方面的研究还较少。本研究以中蔬四号番茄为背景材料,研究了番茄细胞壁蔗糖转化酶抑制蛋白在番茄植株抵抗低温胁迫中的功能。由于蔗糖转化酶抑制蛋白的在种子中过量表达会导致植物不育,因此在研究中我们首先扩增了在种子不表达的启动子rbcS3A,连接GUS,构建载体p1300RG,通过农杆菌介导的组织培养法转化番茄,以GUS染色的方法验证了启动子rbcS3A引导的外源基因在番茄中的表达模式。实验结果证实了其在种子中不表达。接下来将启动子rbcS3A连接番茄细胞壁蔗糖转化酶抑制蛋白基因INVINH1,构建了载体p1300RI,通过农杆菌介导的组织培养法转化番茄。PCR及RT-PCR的结果证实了成功获得3个株系的Le-INVINH1过量植株。随后对原有的番茄蔗糖转化酶抑制蛋白(Le-INVINH1)RNA干扰植株与野生型番茄及Le-INVINH1过量表达植株进行一系列的低温胁迫对比性研究,并通过荧光定量RT-PCR对低温胁迫条件下转基因植株中一些与植物低温胁迫相关的基因进行了表达量分析。得出了以下结论:低温胁迫条件下,细胞壁蔗糖转化酶抑制蛋白基因INVINH1表达量下调,蔗糖转化酶基因表达量上调。细胞壁蔗糖转化酶活性增加,植物胞内葡萄糖含量增加。而胞内葡萄糖含量水平的变化影响了CBFs及ABA合成相关基因表达量的变化。最终CBFs及ABA合成相关基因的表达变化共同影响了植物对低温的耐受性。
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