辣椒转几丁质酶基因研究

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八个辣椒品种(湘椒十一号、赣椒一号、ATLANTIC、中椒七号、猪大肠辣椒、甜杂七号、京研辣椒三号、朝天椒)的子叶和下胚轴接种在附加不同激素的MS培养基上,经过芽诱导、芽伸长、生根、移栽入盆四个阶段,得到完整的再生植株.实验结果显示:6~8 d的苗龄最佳,子叶的分化率高于下胚轴,培养基中添加AgNO<,3>明显促进外植体的分化,GA<,3>是芽伸长的关键因子,IBA的生根效果要好于无激素MS培养基.通过这一过程,建立起一个基于最佳激素组合的高效植株再生体系.这一体系克服了基因型差异对辣椒体外再生的影响,从而解决了农杆菌介导转化的关键问题之一.本实验基于子叶外植体的离体培养体系的建立,将外源几丁质酶基因通过农杆菌介导法转入辣椒.通过农杆菌介导法将几丁质酶基因转入四个辣椒品种.子叶外植体在农杆菌感染前预培养2天,有利于提高转化率;子叶外植体感染农杆菌后,与农杆菌共培养2天的转化率最高.经过生根阶段的筛选的转化植株,通过PCR检测有19株呈PCR阳性反应,进一步通过PCR-Southern检测证实外源基因已经整合到植物基因组中.
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