Survivin蛋白在大鼠急性出血坏死性胰腺炎中的表达及作用

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目的:通过人为诱导建立大鼠急性出血坏死性胰腺炎(ANP)动物实验模型,动态观察胰腺损伤的各项指标,并检测凋亡抑制蛋白Survivin的表达在ANP中的表达及作用,从而揭示Survivin蛋白在ANP发病机制中的作用,为临床ANP诊断和治疗提供新的有效的靶点。方法:40只健康雄性SD大鼠随机分为ANP造模后6h、12h、24h和假手术组(SO组)共4组,每组10只。手术前禁食12h,自由饮水。实验组胰胆管内推注4.5%牛磺胆酸钠1.0ml/Kg,SO组注射等量生理盐水。取各不同时间点处死SD大鼠,从心脏采血测定血淀粉酶(AMY)、血脂肪酶(LPL)的浓度。各组SD大鼠处死时取胰头部胰腺组织,应用免疫组化及RT-PCR方法检测Survivin蛋白在胰腺组织中的表达,TUNEL法检测凋亡的胰腺组织细胞的凋亡指数。结果:假手术组(SO组)大鼠胰腺组织结构清楚,细胞形态正常,ANP实验组胰腺组织充血水肿明显,胰腺局部出现坏死灶,少量淡红色血性腹水,胰周脂肪组织皂化、出血。血清AMY于造模后6h即升高,12h左右达峰值,以后逐渐下降,但仍高于假手术组。SO组:(1276±213)U/L;ANP组(6343±287)U/L。两组总体均数间差别有统计学意义(P<0.05)。大鼠ANP建立6h血清LPL即明显下降,随胰腺炎症程度的加重,血清LPL值呈逐渐下降趋势,各实验组与假手术组相比较差别有统计学意义(P <0.01)。免疫组化:假手术组(SO组)胰腺组织细胞中未见有Survivin蛋白表达,造模后ANP实验组Survivin蛋白的表达在胰腺组织细胞中主要集中于胰腺腺泡和导管细胞,呈棕褐色细颗粒沙状,ANP6h、12h、24h组Survivin的光密度值积分分别是5743±459、9041±893、13022±803,通过t-检验各组间比较差别有统计学意义(P <0.05)。RT-PCR:假手术组胰腺组织中未见Survivin蛋白mRNA的表达,大鼠ANP造模后6h即可见到Survivin蛋白mRNA的表达,并且随ANP病程的进展,Survivin蛋白mRNA的表达水平呈现逐渐增强的趋势。胰腺组织凋亡细胞呈棕黄色,假手术组胰腺组织细胞凋亡极少。ANP造模后,随胰腺炎症严重程度的加重,胰腺腺泡细胞凋亡指数逐渐降低,与假手术组相比较差别有显著统计学意义(P <0.01),胰腺导管细胞凋亡指数逐渐升高,与假手术组相比较差别有统计学意义(P <0.05)。结论:1.大鼠ANP动物实验随病程延长,胰腺组织细胞损伤程度呈逐渐加重趋势。2.血淀粉酶、血脂肪酶对ANP诊断有着重要的意义,但对于评估ANP损伤严重程度无重要参考意义。3.Survivin在ANP中的表达显著增加,Survivin表达增加与ANP损伤程度有密切关系,对于判断ANP预后有重要意义。
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