miR-210促进小鼠BMMSCs血管内皮生长因子的表达和分泌

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:whg_2001
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:研究小分子非编码RNA miR-210对小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)表达和分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,为骨组织工程血管化研究提供实验数据。  方法:首先体外全骨髓液贴壁法培养小鼠 BMMSCs,通过构建慢病毒载体Lenti-LacZ和 Lenti-miR-210,分别转染小鼠 BMMSCs和人脐静脉内皮细胞(HUVEC);MTT法检测慢病毒载体对小鼠 BMMSCs增殖情况的影响;Lenti-miR-210/BMMSCs和 Lenti-LacZ/BMMSCs于转染慢病毒载体后培养至第7d RT-PCR检测VEGF mRNA基因表达,第14d Western blot检测VEGF蛋白表达;通过PKH26红色荧光染料对Lenti-miR-210/HUVEC和Lenti-LacZ/HUVEC进行染色后,进行24h Matrigel成管实验,通过荧光显微镜观察成管效果,统计两组成管长度;构建HyStem-HP凝胶缓释系统,agomir-210和agomir-NC与BMMSCs复合 HyStem-HP凝胶后行裸鼠皮下注射,7d后取标本进行10%中性福尔马林固定,脱水后包埋,石蜡切片行CD31免疫荧光染色,检测CD31阳性细胞含量。使使用SPSS13.0软件进行统计分析,实验数据以均数±标准差形式呈现,t检验和方差分析处理实验数据,检验水准取α=0.05。  结果:全骨髓液培养后5-7d,镜下见部分细胞呈梭形或多角形,散在分布;传代后贴壁细胞呈梭形旋涡状生长,细胞形态随传代培养逐渐一致;miR-210慢病毒载体转染小鼠BMMSCs和HUVEC,当MOI=10时,转染效率最高,MTT法检测病毒对BMMSCs增殖无影响,Lenti-miR-210和Lenti-LacZ两组细胞培养第7d RT-PCR检测VEGF mRNA基因表达结果,miR-210促进小鼠BMMSCs VEGF的表达(P<0.01);第14d Western blot检测两组细胞VEGF蛋白表达,miR-210组VEGF蛋白表达明显高于对照组,与 RT-PCR结果一致;Matrigel成管实验24h结果 Lenti-miR-210组与 Lenti-LacZ相比,环形管状结构明显,端端接触多,管壁更完整;统计小管长度后比较两组小管长度,差异有统计学意义(P<0.05);agomir-210和agomir-NC分别与BMMSCs复合HyStem-HP凝胶缓释系统裸鼠皮下注射7d后标本CD31免疫荧光染色结果统计分析显示agomir-210组CD31阳性细胞含量明显高于agomir-NC组,约是agomir-NC组的3倍。  结论:通过慢病毒载体,转染小鼠BMMSCs,过表达目的基因miR-210后能够有效促进小鼠BMMSCs VEGF的表达和分泌,agomir-210 HyStem-HP凝胶裸鼠皮下实验表明,agomir-210促进BMMSCs微血管的形成。
其他文献
2015年8月,第九届茅盾文学奖揭晓,王蒙以其描写边疆生活的《这边风景》获奖,于是,王蒙的新疆生活与创作实践再次进入人们的视野。新疆,之于王蒙究竟意味着什么?它提供了怎样
陈新—高频彩票稳赚第一人,让天下没有买不中的号码,“肯定中”98.4%的准确率是一个前无古人,后无来者,震古烁金,旷世绝学盖世彩票神算工具,“肯定中”虽不能令你一夜暴富,但
教育是个体和社会向上提升的重要力量,在实现社会公平正义中扮演至关重要的角色。缩小社会差距,推进社会和谐,教育公平是前提、基础。胡锦涛总书记在去年全国优秀教师代表座谈会上就明确指出,“要把促进教育公平作为国家基本教育政策”。温家宝总理也曾强调,“教育公平是重要的社会公平”。近年来,我们国家大力加强教育工作,不断地推进教育公平,让更多民众分享改革发展的成果,奠定了社会主义和谐社会的基石。在目前形势下,
调查性报道近来得到媒体的高度重视,甚至被称为“报纸再生的希望”。这一发端于西方的报道方式在我国已逐步兴起,人们不能仅是“拿来”,而只能在难免的挫折中探索找到适合自
随着新课改的步伐,教师们已经有意识地把合作学习这种形式引入数学课堂教学.但是仔细观察,就可以发现,多数小组讨论仅仅停留在形式之上.那么,怎样才能使合作学习有效实施于数
目的:观察单侧完全性唇裂与单侧不完全性唇裂患儿行唇裂鼻畸形一期矫治术,统一采用Noordhoff唇裂术式,并在术后半年佩戴鼻撑矫治鼻畸形,研究鼻撑对不同唇裂鼻畸形一期整复术
目的错(?)畸形是青少年常见的口腔疾病之一,其患病率在口腔疾病中仅次于龋病和牙周病而位居第三。患病率高应引起口腔医学工作者的重视。初中阶段的青少年其心理发育也处在较
综合利用常规资料、加密自动站观测资料、NCEP再分析资料、CloudSat卫星及多普勒天气雷达资料,分析了2007年7月18日济南市百年一遇的突发性大暴雨天气过程的成因及中尺度特征
同志们:  这次全省高校人文社会科学重点研究基地工作会议的主要任务是:回顾总结全省高校人文社科重点研究基地建设工作,交流经验,明确任务,部署工作,推进全省高校人文社科重点研究基地在新的起点上实现又好又快发展。  下面,按照会议安排,我就全省高校人文社会科学重点研究基地建设工作,讲三个方面的意见。    一、肯定成绩,总结经验,进一步把力量凝聚到全省高校人文社会科学重点研究基地建设工作上来  全省高
介入索马里事务在许多方面都被构思成一次公共关系的表演,这种表演又进一步被美国海军海豹突击队的行动风格所强化。该突击队(海陆空单位)在1992年12月9日黎明前的几小时里戏