本论文主要包含两部分内容，第一部分建立了一种利用实时PCR结合探针熔解分析技术对结核分枝杆菌常用注射类二线抗结核药（卡那霉素、阿米卡星和卷曲霉素）耐药突变进行快速检测的方法。第二部分首次建立了分枝杆菌菌种分型检测用参考品，主要包括分枝杆菌培养基法和生化法菌种鉴定用的参照菌株，临床和环境常见分枝杆菌对照菌株参考品。　　第一部分:由于结核分杆菌生长速度的限制，目前临床上用于检测结核分枝杆菌药物敏感性的方法一般需要数周的时间，不利于临床的诊断和治疗。因此，临床上迫切需要一种能够快速准确地检测结核分枝杆菌耐药性的方法。临床上二线药的使用越来越普遍，耐药现象越来越多，本论文建立了一种利用探针熔解分析技术对常用注射类二线抗结核药的耐药突变进行快速检测的方法。导致结核分枝杆菌对卡那霉素、阿米卡星和卷曲霉素耐药的基因存在交叉现象，主要是由rrs基因的3’末端的点突变导致的。研究表明，rrs基因的3’末端的点突变是导致注射类抗结核药耐药的主要原因，rrs1401A＞G、rrs1402C＞T以及rrs1484G＞T等位点突变都可以导致卡那霉素、阿米卡星和卷曲霉素耐药。rrs1473G＞A或G＞T的突变只导致大环多肽类（卷曲霉素和紫霉素）的耐药。另外，eis启动子突变-10区和-35区的突变可以引起卡那霉素低水平耐药。通过筛选特异性好，扩增效率高的引物并结合不对称PCR技术达到扩增大量单链的目的;同时筛选可覆盖所有主要突变位点，且分型效果好的探针，通过熔解曲线过程中探针与扩增产物杂交后熔点的不同以区分野生型与突变型。首先通过人工合成靶序列初步考察探针区分野生型与突变型的能力，后经实际样本检测考察体系的分型能力，从而建立起一个快速、准确、经济的结核分枝杆菌常用注射类二线抗结核药（卡那霉素、阿米卡星、卷曲霉素）耐药检测体系。　　第二部分:近年来，分枝杆菌病的感染率和发病率呈逐渐上升趋势，分枝杆菌菌种分型显得尤为重要。本论文建立了分枝杆菌菌种分型检测用参考品，主要包括分枝杆菌培养基法和生化法菌种鉴定用的参照菌株，临床和环境常见分枝杆菌对照菌株参考品。收集了中国食品药品检定研究院保藏的49种分枝杆菌，分别采用传统的分枝杆菌菌种鉴定方法、16S rRNA序列分析法和16S～23S rRNA转录间隔区(ITS)序列分析法等确认菌株的正确性。在此基础上，分别选择15种和23种分枝杆菌制作分枝杆菌培养基法和生化法菌种鉴定用的参照菌株、临床和环境常见分枝杆菌对照菌株参考品。将选出的15种分枝杆菌进行扩大培养，然后进行研磨、比浊、稀释、分装、保藏和污染验证等步骤，制备了分枝杆菌培养基法和生化法菌种鉴定用的参照菌株。将选出的23种分枝杆菌进行扩大培养，然后进行研磨、比浊、稀释、灭活、验证、分装等步骤，制备了临床和环境常见分枝杆菌对照菌株参考品。