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魔芋低聚糖是魔芋葡甘露聚糖的降解产物,具有益生元等活性。为了研究魔芋低聚糖的免疫活性,本文对魔芋低聚糖粗品采用柱分离技术进行了纯化,通过酸水解、高碘酸氧化和Smith降解,并配合气相(GC)、液质(LC-ESI-MS)、红外(IR)等方法对魔芋低聚糖的单糖组成、糖苷键连接方式等结构信息进行了分析研究。此外,为了评价其免疫活性,本文采用了环磷酰胺诱导免疫低下小鼠模型和体外魔芋低聚糖诱导RAW264.7细胞免疫调节实验,对其免疫活性进行了系统考察。本文主要研究结果如下:1、魔芋低聚糖的分离纯化和结构初探采用DEAE52离子交换柱对魔芋低聚糖进行了初步分离,得到3个洗脱组分KOS-A、KOS-B和KOS-C;采用Sephadex G-15凝胶柱,对收集的主要组分KOS-A(占多糖总量的83.7%)进行进一步分离,得到一个单一组分KOS1,采用紫外全波段光谱扫描和Sephadex G-15凝胶柱层析对KOS1进行纯化鉴定,结果表明KOS1为均一度较高的低聚糖。气相色谱结果表明KOS1含有甘露糖和葡萄糖两种单糖,且两者摩尔比为1.6:1;红外光谱图显示KOS1有糖类物质的特征吸收峰,且含有吡喃糖苷和α-D-甘露糖;高碘酸氧化和Smith降解分析表明:KOS1中存在1→3、1→4、1→2、1→6键型,平均每4.3个糖残基有一个非还原末端1→或1→6糖苷键,平均每1.4个糖残基有一个1→2或1→4糖苷键;LC-ESI-MS/MS解析出魔芋低聚糖KOS1中主要由聚合度为2-5的寡糖组成。2、魔芋低聚糖的体内免疫活性研究KOS1对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠有拮抗作用。与模型对照组相比,KOS1各剂量组小鼠的胸腺指数和脾脏指数均呈现上升趋势,1000 mg/(kg.bw)KOS1剂量组小鼠的胸腺指数与模型组有极显著性差异(P<0.01);KOS1呈剂量效应地提高细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-2的分泌量;并能协同ConA和LPS促进免疫抑制小鼠脾淋巴细胞的增殖作用;同时还能增强免疫抑制小鼠NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性;1000 mg/(kg.bw)的KOS1可以显著地提高环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠单核-巨噬细胞的吞噬作用(P<0.05);250-1000 mg/(kg.bw)的KOS1可以极显著地提高免疫抑制小鼠血清溶血素的水平(P<0.01),并可以将血清溶血素的水平恢复至接近正常水平;KOS1各剂量组均能极显著地提高免疫抑制小鼠的乳酸脱氢酶(LDH)活性(P<0.01),并呈现出剂量效应关系。3、魔芋低聚糖对腹腔巨噬细胞的免疫调节作用研究采用RAW264.7巨噬细胞作为细胞模型,评估KOS1的体外免疫活性。KOS1可以促进RAW264.7细胞的增殖,且对HepG-2细胞没有直接的杀伤作用;被KOS1激活后的RAW264.7细胞上清液和RAW264.7细胞均可以显著地抑制HepG-2细胞的增殖;ELISA实验结果表明,KOS1作用于RAW264.7细胞后,可以呈剂量依赖性地增强NO、IL-1β、IL-6的分泌量(P<0.05);RT-PCR结果显示KOS1可以上调iNOS、IL-1β、IL-6的mRNA表达,该结果与细胞因子结果相一致;NF-κB P65基因的表达也明显提高,推测KOS1的免疫活性作用机制可能与NF-κB通路有关。