论文部分内容阅读
一、研究背景原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma HCC)在我国是常见的、恶性程度较高的肿瘤,有很高的发病率和死亡率;主要的治疗手段是手术治疗,但术后肿瘤的复发是影响预后的主要因素。新生血管在肿瘤的生长,进展和转移过程中均扮演重要的角色;肝癌是典型的富血管肿瘤,新生血管对于肝癌的生物学行为尤为重要。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor VEGF)是一组结构上相关联的蛋白。它通过与其受体结合而发挥生物学效应,促进血管的新生和成熟。目前VEGF在肿瘤血管的发生中所起的关键作用已经做了深入的研究并得到了肯定。通过标记肿瘤微血管内皮细胞计算微血管密度(microvascular densit MVD)是常用的定量肿瘤血管的方法,在许多肿瘤中都已被证实与肿瘤的预后正相关。然而,也有作者得出了相反的结论,归结原因,可能与采用了不同的方法标记内皮细胞有关。以前曾有报道认为CD34免疫染色的微血管密度(MVD by CD34immunostaining MVD-CD34)在评价原发性肝细胞癌术后患者的预后方面,优于其它内皮标记物比如CD31、vWF等,但近来有研究者认为CD34是一个泛血管内皮细胞的标记物,它不仅在增殖期的血管内皮表达,而且也在成熟的血管内皮表达,因此,用CD34标记新生血管内皮可能并不理想。CD105又称endoglin,是一种细胞膜糖蛋白,它在正常组织不表达或者弱表达,但在肿瘤新生血管内皮表达明显增强,特别是在刚形成的血管和未成熟的血管内皮表达较高。最近的研究已经证明,在乳腺癌、恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌等肿瘤中,CD105是一个理想的新生血管标记物,而且在乳腺癌、非小细胞肺癌、结肠癌等肿瘤中,MVD-CD105在判断预后方面优于MVD-CD34。但目前有关CD105在原发性肝细胞癌上的表达和意义尚了解较少。二、目的本研究的目的是通过构建组织芯片和免疫组织化学染色的方法,探讨CD105在原发性肝细胞癌及癌旁组织中的表达及临床病理意义,并与CD34和VEGF进行比较研究和相关性分析,明确CD105在判断手术预后方面的作用。三、材料与方法1、材料:选取1999,1—2003,12在南方医科大学珠江医院进行原发性肝癌根治切除术的石蜡包埋标本100例。纳入和排除标准:患者病理诊断为原发性肝细胞肝癌,未进行术前及术后的经动脉化疗栓塞等辅助治疗,无远处转移(包括术后肝外转移),术后每3—6个月复查一次血清AFP,胸部X光透视,腹部B超,对于可疑复发、转移病例,进行了必要的检查明确诊断;2、回顾分析患者临床病理特征和随访资料:研究时限为术后40个月。无病生存时间是指手术到肿瘤复发的时间;3、构建组织芯片:每例标本取两个肿瘤组织点位和一个癌旁非肿瘤组织点位,构建孔径为1.1mm,15×10排列的组织芯片;4、免疫组织化学染色和观察指标分析:连续切片后分别用CD105、CD34、VEGF单克隆抗体进行免疫组化染色,进行染色情况判定,CD105免疫染色的微血管密度(MVD by CD105 immunostaining MVD-CD105)和CD34免疫染色的微血管密度(MVD by CD34 immunostaining MVD-CD34)定量计数、VEGF的半定量计数。获得的数据再与患者的临床病理特征,无病生存时间进行统计学分析。5、数据统计:连续变量之间的比较采用Student’s t检验;连续变量之间的相关分析采用Pearson’s相关分析;等级变量的相关分析采用Spearman’s相关分析;用Kaplan-Meier法估计无病生存率;用logrank检验进行各组间无病生存率的比较。所有的统计分析用SPSS11.5统计软件完成,以P≤0.05为具有显著性差异。四、结果1、CD105,CD34均表达在微血管内皮细胞,它们在所有的肝癌组织中均有阳性表达(100%,100/100),然而,在癌旁非肿瘤组织中CD105有27例阳性表达(27%,27/100),CD34仅有5例阳性表达(5%,5/100);癌旁非肿瘤组织肝硬化有69例(69%,69/100),其中CD105表达阳性为24例(34.8%,24/69);VEGF在肝癌组织中表达强度分为四级,其中阴性12例(12%,12/100),弱阳性15例(15%,15/100),阳性43例(43%,43/100),强阳性30例(30%,30/100);2、肝癌内MVD-CD105与MVD-CD34呈正直线相关(r=0.575,P＜0.001);癌旁非肿瘤组织CD105表达阳性者,相应的肝癌组织内MVD-CD105显著增高(r=0.405,P＜0.001);肝癌内MVD-CD105数值随VEGF表达的增强而升高,呈正相关(r=0.281,P=0.005),但MVD-CD34与VEGF表达强度无相关关系(r=0.095,P=0.348);3、肝癌内高TNM分期组和低TNM分期组相比,MVD-CD34(t=-2.362,P=0.020)和MVD-CD105(t=-2.220,P=0.029)值均显著增大;肝癌内有静脉侵犯组MVD-CD105值较无静脉侵犯组显著增大(t=2.468,P=0.015),但MVD-CD34值无显著差异(t=0.768,P=0.444);4、将肝癌组织内MVD值的中位数做为分界,高MVD-CD105组较低MVD-CD105组的无病生存期降低有显著差别(χ~2=16.32,P＜0.001),而高MVD-CD34组和低MVD-CD34组相比,无病生存期则无显著差别(χ~2=3.34,P=0.068)。另外癌旁非肿瘤组织CD105阳性组的无病生存期较阴性组显著降低(χ~2=5.73,P=0.017)。五、结论1、CD105是原发性肝细胞癌内新生血管的理想标记物,CD105高表达与较晚的临床分期和肿瘤较强的侵袭性有关;2、肿瘤内MVD-CD105是原发性肝细胞癌术后的预后指标;3、癌旁非肿瘤组织内CD105的表达也是原发性肝细胞癌术后的预后指标;4、CD105有可能是抗肝细胞癌血管治疗的理想靶点。