研究背景和目的动脉粥样硬化（Atherosclerosis,As）是慢性肾脏病（Chronic kidney disease,CKD）患者高发的心血管疾病（Cardiolvascular disease,CVD）。CKD可以加速As的形成。既往的研究结果和文献报道,血管紧张素II（Angiotensin II,Ang Ⅱ）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases,NOXs）均与CKD和As紧密相关。然而,仍然鲜有报道关注CKD加速As形成过程中,早期炎症阶段Ang Ⅱ和NOXs在其中的相互作用和表现情况。运用Ang Ⅱ 1型受体拮抗剂——氯沙坦,可以在动物模型中观察Ang Ⅱ在整个As形成过程中的作用。本研究期望了解各个炎症细胞和炎症相关因子和蛋白在As形成过程中水平的变化,探讨Ang Ⅱ促血管内皮细胞炎症反应NOXs的表达时间依赖性和通路机制。实验方法1.体内实验（1）用5/6肾切除法（5/6 Nephrectomy,5/6Nx）构建ApoE^-/-小鼠CKD+As模型。（2）将ApoE^-/-小鼠分为3组,分别为假手术的对照组、5/6Nx组、5/6Nx+losartan组,建模手术结束2w后开始予以5/6Nx+氯沙坦组小鼠15mg/kg/d剂量的氯沙坦灌胃,其余小鼠给予等体积的1%羧甲基纤维素钠溶液。（3）建模前、建模成功后、As早期和As晚期分别取小鼠尾静脉血测Scr、BUN、Ang Ⅱ、中性粒细胞和单核细胞比例、VCAM-1、CINC-1、MCP-1在外周血中的水平。（4）连续灌胃4w后,随机抽取各小组小鼠一半的数量摘取小鼠心脏标本,制作主动脉根部主动脉瓣切片,胸主动脉和腹主动脉留取用于实时荧光定量PCR和Western Blot检测;剩余小鼠在继续灌胃给药16w后同上方法留取标本待测。（5）用HE染色法观测小鼠主动脉根部As斑块形成的情况,IHC法观测主动脉根部中性粒细胞、巨噬细胞浸润情况,Ly6G标记中性粒细胞、CD68标记巨噬细胞,NOX1、NOX2、NOX4抗体标记观测主动脉根部主动脉管壁三种NOXs蛋白的表达情况,主动脉根部的各项指标统计用Image Pro Plus 6.0进行阳性指标面积的统计,计算阳性指标面积占血管壁横截面积的比例,再用SPSS 19.0软件进行统计分析。（6）用PCR和WB方法检测小鼠胸腹主动脉NOX1、NOX2和NOX4的m RNA和蛋白表达情况,并用SPSS 19.0软件进行统计分析。2.体外实验（1）用CCK-8法检测适用于Ang Ⅱ干预HUVECs实验的浓度。（2）Ang Ⅱ干预HUVECs10、20、30、40、50、60min和1、2、4、8、12、24h,运用DHE和DCFH-DA荧光探针检测细胞ROS的合成情况,运用实时荧光定量PCR和Western Blot方法检测NOX1、NOX2、NOX4的m RNA和蛋白表达情况以及p-p38、p-ERK1/2、p-JNK的蛋白表达情况,干预HUVECs后留取的培养基上清液用ELISA检测试剂盒检测上清液中IL-8、MCP-1、TNF-α、IL-6的水平。（3）运用apocynin辅助探究Ang Ⅱ刺激HUVECs后各NOXs蛋白和MAPK通路的表达。结果1.体内实验结果1.1血清生化分析5/6Nx的ApoE^-/-小鼠外周血Scr、BUN、Ang Ⅱ水平稳定升高（p<0.05）,氯沙坦可降低5/6Nx组Ang Ⅱ水平（p<0.01）。1.2 PBMCs免疫细胞和趋化因子水平（1）5/6Nx组外周血中性粒细胞比例和趋化因子CINC-1均在As早期时呈一过性升高（p<0.001）,在As晚期下降,5/6Nx组水平低于对照组和5/6Nx+氯沙坦组（p<0.05）。（2）外周血单核细胞比例和趋化因子MCP-1在整个As形成过程呈逐渐升高,晚期As达到最高（p<0.05）。1.3小鼠主动脉取材检测结果（1）HE染色结果可见5/6Nx组As斑块较对照组As斑块面积比例高,氯沙坦的持续干预可以部分抑制5/6Nx导致的斑块形成速度和面积比例,但仍高于对照组。（2）As早期5/6Nx组的NOX1、NOX2和NOX4的表达高于对照组,氯沙坦给药4w可以部分抑制NOX1和NOX2的激活,但不能有效控制主动脉中的NOX4表达水平（p<0.05）。（3）As晚期5/6Nx组的NOX1和NOX2的表达仍较对照组高（p<0.05）,但予以氯沙坦持续干预16w仍能部分控制NOX1的表达,但不能有效控制NOX2的表达,As晚期三组小鼠主动脉NOX4的表达无明显差异（p<0.05）。2.体外实验结果2.1 Ang Ⅱ干预HUVECs早、晚期NOXs、ROS、MAPK的表达情况（1）Ang Ⅱ干预HUVECs 10、20、30、40、50、60min后,NOX1和NOX2的m RNA和蛋白表达在30和40min处达到最大合成量,NOX4的m RNA和蛋白表达在20和30min处达到最大合成量（p<0.05）。Ang Ⅱ干预HUVECs 1、2、4、8、12、24h后,NOX1和NOX2的m RNA和蛋白表达在8h处达到最大合成量,NOX4的m RNA和蛋白表达在4h处达到最大合成量（p<0.05）。（2）Ang Ⅱ干预HUVECs 10、20、30、40、50、60min后,O2·-的合成在30和40min处最高（p<0.05）,H₂O₂的合成在20和30min处最高（p<0.05）,作用HUVECs 1、2、4、8、12、24h后O2·-和H₂O₂的合成组间无明显统计学差异。（3）Ang Ⅱ干预HUVECs 10、20、30、40、50、60min后p-p38、p-ERK1/2、p-JNK蛋白表达最高时间段分别在30-40min、30min、20-30min。Ang Ⅱ作用HUVECs 1、2、4、8、12、24h后MAPK的三条通路的p-p38、p-ERK1/2、p-JNK蛋白表达最高时间点分别在8h、8h、4h处（p<0.05）。（4）Ang Ⅱ干预HUVECs,4h时细胞因子IL-8、MCP-1、TNF-α、IL-6合成分泌均达到最高水平（p<0.001）。（5）预处理apocynin后Ang Ⅱ干预HUVECs,发现H₂O₂由NOX4经JNK通路激活合成,O2·-主要由NOX1和NOX2经p38和ERK1/2通路激活合成。结论1.5/6Nx加速ApoE^-/-小鼠的主动脉根部As斑块形成,氯沙坦的持续干预可部分抑制斑块形成速度和面积比例。2.在As早期,氯沙坦可有效降低部分Ang Ⅱ、VCAM-1、CINC-1、中性粒细胞比例水平和主动脉NOX1、NOX2的表达水平。3.在As晚期,Ang Ⅱ并非主导As形成和持续加重的最主要因素。4.Ang Ⅱ可在早期和晚期激活HUVECs的MAPK的三条p38、ERK1/2、JNK通路,促使NOX1、NOX2、NOX4表达增高,NOX4的激活主要通过JNK通路,NOX1和NOX2的激活主要通过p38和ERK1/2通路。5.H₂O₂的合成由NOX4激活,O2·-的合成由NOX1和NOX2激活,O2·-和H₂O₂的合成主要作为第二信使介导晚期炎症的激活。6.细胞因子的合成分泌是Ang Ⅱ晚期炎症的效应。