光合细菌(球形红假单胞菌)发酵产辅酶Q10的研究

被引量 : 0次 | 上传用户:xiaoge1011
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
微生物发酵法生产辅酶Q10是最有潜力实现工业化的生产方法,辅酶Q10的医疗价值和保健功能不断得到应用,光合细菌富含辅酶Q10,因此本论文以球形红假单胞菌(R. sphaeroides )1.1737T为出发菌株,通过紫外和化学复合诱变,先筛选出抗罗红霉素突变株,然后以该突变株为出发菌株,筛选得到耐对羟基苯甲酸的突变株PHBr-2,其辅酶Q10产量可达50.60mg/L。突变株PHBr-2连续传代5次后,其辅酶Q10的产量为49.5mg/L,比原始菌株R. sphaeroides R1(16.37mg/L)提高了202.38%。证明经紫外诱变和亚硝基胍复合诱变获得的突变株PHBr-2的性状能稳定遗传。采用紫外分光光度法测定辅酶Q10含量,确定以碱皂化法提取辅酶Q10,并对碱皂化法进行优化,得到了碱皂化法的工艺为:菌悬液离心并洗涤菌体,在湿菌体中加入5mL丙酮,冰浴条件下超声波破碎并移入圆底烧瓶中,加入pH 3.0的酸性水10mL,搅拌均匀,90℃下回流1h,缓慢加入10% NaOH 15mL混匀,90℃回流1h,迅速冷却,加入25mL正己烷提取2次,合并萃取液,去离子水洗至中性,以无水硫酸钠脱水至澄清,真空旋转蒸发浓缩,再用10mL无水乙醇溶解,即得辅酶Q10的抽提液。研究Mg2+、Fe2+、Mn2+的不同浓度对辅酶Q10产量的影响,表明其对辅酶Q10的生产起促进作用。通过正交实验法确定了最优的发酵培养基为(g/L):无水乙酸钠1,柠檬酸钠2,蛋白胨3,酵母膏3,硫酸铵7,磷酸二氢钾3,硫酸镁1,氯化钠2,碳酸氢钠1,加入微量元素溶液、维生素溶液各1mL。最佳培养条件为:培养基初始pH值6.5、温度30℃、光强3000Lx、接种量4%。经过培养基及培养条件优化后,菌株PHBr-2的辅酶Q10产量可达74.4mg/L,比优化前(49.5mg/L)提高了50.30%。用硅胶柱层析法对辅酶Q10粗提液进行分离纯化。比较了不同孔径分布的200-300目与80-120目粗孔Ⅱ号硅胶的分离效果,确定采用80-120目粗孔Ⅱ号硅胶为固定相,以正己烷/无水乙醇(V/V=8:2)为流动相洗脱,经过无水乙醇结晶纯化,辅酶Q10粗提液的提纯率为77.08%。通过对该菌不同培养模式的初步探索,将接种后的发酵培养基在30℃、150r/min摇床培养24h后,将其放置在光照强度为3000Lx的培养箱里静置培养,比接种后直接光照静置培养,其辅酶Q10产量由74.4mg/L提高到78.36mg/L,通过观察溶氧、pH值在发酵过程中的变化,得出溶氧是辅酶Q10发酵中的重要因素,因此今后可通过探讨不同的培养模式及溶氧水平的控制提高辅酶Q10的产量。
其他文献
非洲大陆由于长期存在的非文字文化的影响,习惯法的生成途径大多离不开口耳相传。“口头非洲法”(O ral A frican Law)的创制方式依创制的主体不同,可以分为个体创制和群体创
认知疗法于本世纪60-70年代在美国产生,在数十年的发展过程中其理论与治疗技术不断得以丰富和发展。它凭着治疗理念清晰、易被接受;疗程短,见效快等特点,已成为心理咨询与治
<正>普通高中《英语课程标准》在文化意识目标中要求中学生要理解英语中的常用成语和俗语。基于此,现将与十二生肖有关的英语成语介绍给同学们,希望对同学们有所帮助。
期刊
随着我区公安信息化建设的深入推进,公安机关积累了大量的基础信息数据,迫切希望进行信息的深层次挖掘,充分发挥情报信息的价值,为公安实战服务。情报分析系统就是在我区公安
在简·奥斯汀和弗吉尼亚·伍尔夫的作品中,宴会颇受青睐,且功能各异,对她们小说艺术创新实践的成功起到至关重要的作用。结合她们的文学创作思想,对《傲慢与偏见》和《达罗卫
礼仪教育是公民素质教育的重要内容。西方国家的礼仪教育是与公民道德教育和学校道德教育相结合,通过全面渗透来实现的。东方国家的礼仪教育在德育中的地位特别突出,强调知行
在适当的直角坐标系下求出了三个两两相外切圆的内公切圆与外公切圆之圆心坐标和半径,并得到了诸半径之间的优美关系式.
目的建立体外长期共培养体系和观察方法,为精子发生过程的研究提供细胞模型。方法采用大鼠曲细精管生殖细胞及支持细胞共培养的方法,对睾丸生精细胞作显微镜观察。结果共培养
对化学化工工作者而言,化学反应方程式的键盘输入速度太慢,一直是化学电子文档(包括化学论文、讲稿、结题报告、实验总结等)应用的一大难点.化学文档中通常含有元素符号、分
在科学技术特别是网络技术飞速发展、世界各国联系日益紧密的时代里,信息交流赋予阅读理解能力新的挑战。阅读理解是英语学习中的一个重要内容,是获取信息的一个重要途径,是