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目的探讨CD137-CD137L信号是否通过溶酶体损伤影响小鼠血管平滑肌细胞自噬。方法实验分为两部分:1.采用组织块培养法培养原代小鼠胸主动脉血管平滑肌(vascular smooth muscle cells,VSMCs)。实验分为3组:即空白对照组、混合炎症因子预刺激组(分别先后加入10ng/ml TNF-α,IL-1β,IFN-γ)、CD137-CD137L信号激动组[混合炎症因子+CD137L重组蛋白(终浓度10μg/ml)]。Western blot法检测各组VSMCs内溶酶体相关膜蛋白1(lysosomal associated membrane protein 1,LAMP1)、组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)、组织蛋白酶D(cathepsin D,CTSD)蛋白的表达水平。免疫荧光法检测各组VSMCs内溶酶体相关膜蛋白2(lysosomal associated membrane protein 2,LAMP2)的表达水平。吖啶橙(acridine orange,AO)染色法检测各组VSMCs内溶酶体p H值变化。透射电镜观察各组VSMCs内溶酶体直径变化。2.相同方法制备VSMCs,实验分为4组:即空白对照组、CD137-CD137L信号激动组[混合炎症因子+CD137L重组蛋白(终浓度10μg/ml)]、雷帕霉素组[雷帕霉素(二甲基亚砜DMSO溶解,终浓度100n M)预刺激+混合炎症因子+CD137L重组蛋白(终浓度10μg/ml)]、DMSO组[加入与雷帕霉素组等量DMSO预刺激+混合炎症因子+CD137L重组蛋白(终浓度10μg/ml)]。Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、p62的表达,观察VSMCs自噬流。结果1.Western blot结果显示:混合炎症因子预刺激后,VSMCs中LAMP1、CTSB、CTSD表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。重组CD137L蛋白激动CD137-CD137L信号后,VSMCs内LAMP1、CTSB、CTSD表达水平均明显低于对照组(分别为0.38±0.03比1.08±0.06、0.33±0.04比0.57±0.03、0.37±0.02比0.90±0.02,P<0.05)。2.免疫荧光显示:混合炎症因子预处理组VSMCs内红色荧光斑点总数与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。CD137-CD137L信号激动组VSMCs内红色荧光斑点总数多于对照组[(107.7±6.33)个/细胞比(33.33±3.52)个/细胞,P<0.05]。(3)活细胞AO染色结果显示:混合炎症因子预刺激组VSMCs内红色荧光斑点总数与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。CD137-CD137L信号激动组VSMCs内红色荧光斑点总数少于对照组[(20.66±3.53)个/细胞比(90.33±8.19)个/细胞,P<0.05],表明溶酶体p H值升高。(4)透射电镜观察溶酶体直径显示:混合炎症因子预刺激组VSMCs内溶酶体直径与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。CD137-CD137L信号激动组VSMCs内溶酶体直径大于对照组(1370±133.4nm比565.3±68.6nm,P<0.05)。(5)Western blot显示:重组CD137L蛋白激动CD137-CD137L信号后,VSMCs内p62和LC3Ⅱ蛋白表达水平明显高于对照组(分别为1.15±0.06比0.59±0.07、1.06±0.08比0.54±0.06,P<0.05)。DMSO组p62和LC3Ⅱ蛋白表达水平与CD137激动组比较差异无统计学意义(P>0.05)。加入雷帕霉素后VSMCs内p62和LC3Ⅱ蛋白表达水平较CD137-CD137L信号激活组明显下降(0.53±0.04比1.15±0.06、0.52±0.05比1.06±0.08,P<0.05)。结论CD137-CD137L信号可以通过损伤溶酶体功能影响小鼠血管平滑肌细胞自噬。