体表溃疡是外科常见病,其病因复杂,病程长,治疗难度大,病人很痛苦[1]。现代医学研究发现,酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对皮肤受伤后的快速修复起着十分重要的作用,它能促进皮肤各类细胞的代谢和组织有丝分裂[2]。但正常情况下,人体内aFGF含量很低,伤口的自身修复也是比较缓慢的。aFGF的开发是目前生物医学界最活跃的研究领域之一。国内部份公司利用基因工程技术,将人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)基因重组进大肠杆菌质粒中,已获得了高效表达生物活性产物的工程菌株,其化学结构、理化性质和生物活性与天然haFGF完全一致。本课题应用现有产品重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)进行有关家兔体表溃疡愈合的药理学实验,并且采用放射性同位素(125I)示踪技术结合三氯醋酸(TCA)沉淀技术研究家兔单剂量静脉注射125I-rhaFGF后,在体内主要器官的分布及其排泄途径,为局部用药时吸收至血液内的原形药物的分布特点,提供参考,为该产品的进一步开发利用提供理论依据。一、rhaFGF促进家兔体表溃疡愈合的作用观察目的观察重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)对家兔体表溃疡愈合的促进作用。方法建立家兔的体表溃疡模型,分4组进行实验观察:2个实验组,分别按90AU·(cm2)-1和60AU·(cm2)-1的剂量给予rhaFGF;阳性对照组,按60AU·(cm2)-1的剂量给予rb-bFGF;阴性对照组,按60 AU·(cm2)-1的剂量给予溶媒。采用创面照相、透明膜描记称量法,在溃疡形成后的第1d、4d、8d,分别记录溃疡面面积,计算面积收缩量;采用注水法测量伤腔容积,得到容积缩小量;对面积收缩量和容积缩小量的组间差异进行统计学分析。在溃疡形成后第8d和第14d,取创面组织,经10%甲醛溶液固定后制片,常规HE染色,观察创面肉芽组织生长情况,包括毛细血管生长、胶原沉积与再上皮化变化,以评价修复效果。结果各组家兔溃疡面面积随时间的延长而逐渐缩小,其中rhaFGF 60AU·(cm2)-1组和rb-bFGF 60 AU·(cm2)-1组疗效更显著(P<0. 05)。各组家兔伤腔容积随伤后时间的延长而逐渐缩小,其中rhaFGF 60AU·(cm2)-1组和rb-bFGF 60AU·(cm2)-1组更为明显(P<0. 01)。组织学检查,rhaFGF60AU·(cm2)-1组和rb-bFGF组治疗8d后家兔的溃疡面成纤维细胞生长活跃,数量多,毛细血管胚芽与成纤维细胞数量显著多于阴性对照组。第14d,rhaFGF60AU·(cm2)-1组和rb-bFGF组治疗的家兔溃疡面创面收缩和再上皮化较显著,治疗修复效果明显优于阴性对照组。结论rhaFGF可促进家兔体表溃疡创面的肉芽组织生长、毛细血管胚芽形成与再上皮化,具有促进体表溃疡愈合的作用,。二、125I-rhaFGF在家兔体内的分布和排泄目的观察家兔单剂量静脉注射125I-rhaFGF后,在体内主要器官的分布及其排泄途径,为局部用药时吸收至血液内的原形药物的分布特点,提供参考。方法1) Iodogen法标记rhaFGF,以HPLC法鉴定125I-rhaFGF的放射化学纯度(RCP)。2)按13μg·kg-1的剂量给15只家兔静脉注射125I-rhaFGF,注射后5min、15min、以及2h分别取5只家兔取血并活杀,取血清、肝、肾、肺、心脏、甲状腺、骨髓和尿等组织或体液,组织制成匀浆,分别加入三氯醋酸(TCA)溶液,沉淀蛋白,测定总放射性和TCA酸沉放射性,进行比较。3)按5μg·kg-1的剂量给5只家兔静脉注射125I-rhaFGF,注射后2h、8h、12h、24h、36h和48h分别收集尿和粪,测定排出放射性,计算排出放射性占注入放射性量的百分数。4)将收集的家兔尿经离心后,取上清50μL,直接分子排阻HPLC分离,与标准125I-rhaFGF的色谱图比较。结果1)用HPLC鉴定125I-rhaFGF的放射化学纯度(RCP)为98.13±0.57%。2)家兔静脉注射125I-rhaFGF后,不同时间总放射性和酸沉放射性的分布,按时量(血药浓度-时间)曲线下面积(AUC)排序,以骨髓/股骨、肝、肾、脾、肾上腺的放射性浓度最高,血中放射性浓度相对较低,而生殖系统、肌肉和脑中放射性浓度最低。3)尿总放射性较高,酸沉放射性最低,酸沉放射性AUC和总放射性AUC比值最低,而一些重要组织如骨髓/股骨、肺、脾、肝、肠淋巴结等酸沉淀比值较高。4)血清酸沉比值随时间延长逐步下降。5)放射性12h以前经尿排泄较快,已排出注入量的约68.07±8.99%,但以后排泄较慢,48h尿和粪的累计排出量分别达到注入放射量的80.82±2.82%和0.61±0.61%。6)尿HPLC分析,尿中主要为亲水性125I-代谢产物。结论1) 125I-rhaFGF全身吸收后其分布有一定的靶向性。2)尿中所含的放射性主要是125I-标记降解代谢物。3)静脉注射125I-rhaFGF后随时间的延长,其原形药物的比例逐步下降。4)静脉注射125I-rhaFGF后主要经尿排泄,少量经粪排泄,12h以前经尿排泄较快,以后较慢。5)尿中主要为亲水性125I-代谢产物。