论文部分内容阅读
目的:通过对青岛地区牛源金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,了解其分布状况,为金黄色葡萄球菌的风险评估提供基础数据;对金黄色葡萄球菌的耐药性进行表型和基因型检测,科学合理的指导临床用药,为有效降低耐药性的产生速度和延长药物使用年限提供依据;通过PFGE技术对金黄色葡萄球菌进行分型,了解金黄色葡萄球菌在不同地区和不同来源间的传播机制,为控制疾病的发生提供理论依据。 方法:2016-2017年采集青岛地区27个奶牛场样品,其中奶样1 057份,鼻拭子样品772份,土壤样品103份,奶牛场污水84份,牛舍饮水59份。利用微生物学和PCR方法对所采样品进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定;按照CLSI标准的琼脂稀释法对金黄色葡萄球菌进行耐药表型分析;采用PCR方法对β-内酰胺类、氨基糖苷类及大环内酯类等耐药基因进行检测;运用PFGE技术对金黄色葡萄球菌进行分型研究。 结果:样品分离结果,从2 075份样品中共分离出103株金黄色葡萄球菌,分离率为5.0%,其中在奶样中的分离率为7.2%(76/1 057),在鼻拭子中的分离率为2.5%(19/772),饮水中的分离率为3.4%(2/59),在污水中的分离率为3.6%(3/84),土壤中的分离率为2.9%(3/103)。 药敏试验结果表明,103株金黄色葡萄球菌对氨苄西林的耐药率最高,达87.4%,对甲氧苄啶、苯唑西林和青霉素的耐药率次之,分别为79.6%、77.7%和74.5%,对红霉素、四环素、利福平、克林霉素、利奈唑胺、头孢西丁、泰妙菌素、环丙沙星、左氧氟沙星及恩诺沙星的耐药率介于12.6%-36.9%之间,对头孢噻呋及氯霉素的耐药率较低,分别为4.9%和2.9%,对万古霉素耐药率为5.8%,对庆大霉素的耐药率最低,为1.9%。所有分离株最多对9类药物耐药,其中对3类和4类药物耐药菌株最多,各占11.7%。 耐药基因检测结果,β-内酰胺类基因blaZ检出率最高,为63.1%,mecA基因检出率为23.3%,根据标准确定为MRSA,所有MRSA只携带β-内酰胺类耐药基因;大环内酯类耐药基因ermB、ermC和四环素类耐药基因tet(L)、tet(K)的检出率分别为6.8%、4.9%和12.6%、1.9%;氟苯尼考耐药基因fexA检出率为2.9%;β-内酰胺类耐药基因blaVIM、氨基糖苷类耐药基因ant(4’)-Ia和恶唑烷酮类耐药基因optrA检出率较低,均为0.97%。103株金黄色葡萄球菌均未检测到喹诺酮类耐药基因和万古霉素耐药基因。 PFGE结果,103株金黄色葡萄球菌共有53种电泳模式图,归为46种型,主要型为5、8、9、14和33,这5种型的电泳图完全一致,占所有菌株的37.9%,其中8和33最多,各有10株,占9.7%,并且8型中有8株菌来自场3,33型中10株都来自场14,而场3和场14恰好为分离率最高的两个场,表明场内的克隆传播可能会导致其流行率增高。在MRSA中,主要的PFGE型为8,占37.5%(9/24),其次是9和14,均占8.3%(2/24),2、7、12、13、16、18、19、24、25、43和46各一株,占4.2%。对同一型的样品进行亲缘关系分析,表明在不同奶牛场和不同样品间存在克隆传播现象。 结论:本研究通过对青岛地区牛源金黄色葡萄球菌的耐药表型、耐药基因及PFGE分型研究,初步揭示该地区牛源金黄色葡萄球菌的耐药情况,对金黄色葡萄球菌所致的疾病预防和科学用药治疗具有指导意义,对预防和控制耐药菌及耐药基因的传播提供科学依据。