RT-PCR检测慢粒bcr/abl融合基因mRNA及临床应用价值的研究

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目的:采用RT-PCR 技术建立一种快速,敏感,可靠的分子生物学实验方法用于慢性粒细胞白血病bcr/abl 融合基因的临床常规检测,并探讨RT-PCR 在CML 诊断,治疗评价,自体骨髓移植前血液净化程度及骨髓移植后(BMT)微小残留疾病(MRD)动态监测中的作用。方法:根据bcr 基因和abl 基因断裂点发生的位置和引物设计原则,参照文献设计合成一对引物。建立RT-PCR 方法并对实验条件进行优化,评价此方法的敏感性,特异性和可靠性。并应用该方法检测30 例共46份不同临床分期的CML 患者外周血中bcr/abl融合基因的水平。并对10 例经过药物治疗后缓解的CML 和4 例骨髓移植后CML 病人外周血bcr/abl mRNA 进行监测。结果:建立了RT-PCR 检测bcr/abl mRNA 的临床常规检测方法,该方法可检测出健康人105单个核细胞中的1 个K562 细胞,具有较高的敏感性,应用RT-PCR 检测不同分期CML 病人的bcr/abl 融合基因阳性率分别为慢性期阳性率为92.3%,加速期阳性率为100%,急变期阳性率为100%,治疗缓解期为60.0%,移植后为25.0%。结论:1、bcr/abl mRNA 可作为慢粒患者的特征性的基因标志。2、RT-PCR 可以检测出bcr/abl mRNA 含量为10pg 的RNA 模板,稀释度为10-5水平,灵敏度较高,并具有良好的特异性。3、此方法敏感、快速、适合于临床常规检测,可用于CML 诊断、治疗评价、自体骨髓移植前血液净化程度及BMT 后MRD 监测。为临床制定合理的治疗方案提供有力的分子生物学依据。
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