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目的卵巢癌目前居女性癌症死亡的第4位,在发达国家卵巢癌是妇女生殖器官恶性肿瘤致死原因的第1位。尽管在治疗过程中已广泛开展肿瘤细胞的减灭术及术后联合化疗的方案,但目前卵巢癌患者的5年生存率仍徘徊在20%-30%。因此,寻求新的治疗及逆转化疗药物耐药的方法显得极为重要,有研究表明细胞色素P4501B1(CYP1B1)高表达于多种人类上皮性恶性肿瘤组织中,特别是在与性激素类相关的肿瘤组织中高表达,而在正常的组织中不表达或极低量表达,CYP1B1的存在会对某些抗肿瘤药物产生影响,它能降低肿瘤细胞对特定抗肿瘤药物的敏感性,与化疗药的耐药密切相关。因此,CYP1B1被认为是一个抗癌治疗的新靶点。本课题的研究目标是研制肿瘤组织CYP1B1表达的免疫组化检测试剂盒,并初步应用于卵巢癌组织CYP1B1表达的检测,为肿瘤的诊断和治疗提供新的指标和依据,参考CYP1B1的表达对肿瘤抗药性的影响,以期建立不同肿瘤细胞的药物筛选平台,利用CYP1B1对抗肿瘤药物的影响,从而指导临床用药。方法1、CYP1B1抗体血清的制备利用质谱多反应监测和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法选择信号最强的肽段,与载体合成后作为免疫原免疫家兔,获得抗CYP1B1的抗体血清。2、抗CYP1B1血清抗体效价进行测定生物素标记的CYP1B1抗原包被链亲和素包被平板,将制备成功的兔抗CYP1B1抗体血清用盐析法纯化后作为一抗,用ELISA法对所得的免疫血清抗体效价进行测定。3、CYP1B1免疫组化方法的建立与应用通过多次实验对免疫组化的条件进行筛选和优化,以确定免疫组化的最佳条件,寻找出最适合免疫组化法检测CYP1B1在肿瘤组织中的表达方法并将其应用在卵巢肿瘤组织中。3.结果1、CYP1B1抗体血清的制备用选择所得的特异性肽段A7和A9经过合成后成功制备了抗CYP1B1的免疫血清。2、抗CYP1B1血清抗体效价测定通过多次试验测定,其抗体效价达到1：256。3、CYP1B1免疫组化方法的建立与应用经过反复试验,建立了检测肿瘤组织CYP1B1表达的免疫组化方法：用3%H202消除组织内的内源性过氧化物酶的最佳孵育时间为10min；选用高压高温修复后染色结果更好；最好的一抗浓度为1：100；DAB显色、苏木素复染最佳时间为一分钟。免疫组化方法在卵巢组织应用中检测出CYP1B1在肿瘤组织中有表达在正常组织中不表达。结论成功制备了抗CYP1B1的特异性血清；建立了免疫组化检测肿瘤组织CYP1B1表达的方法,并证实免疫组化可检测卵巢癌CYP1B1的表达,为卵巢癌的诊断和治疗的提供一个新的参考和依据。