HLA-G是一种非经典的HLA-I类基因，与人免疫耐受相关。限定性表达于母胎界面的绒毛膜滋养层细胞，在诱导母体对半同种异体胎儿的妊娠免疫耐受起着重要作用。一些报道还发现黑色素瘤细胞中有HLA-G高水平的mRNA转录及蛋白表达，从而推测HLA-G可能在诱导肿瘤细胞免疫逃逸。相对于经典的HLA-Ia类分子，HLA-G与其他非经典的HLA-Ib类一样在基因和蛋白水平上都表现出极低多态性，目前已公布的HLA-G等位基因仅有16种。HLA-G另一显著特征就是其mRNA初始转录经选择性接切产生至少7种同种异型体，包括4种膜结合型（HLA-G1、-G2、-G3、-G4）和3种可溶性蛋白（sHLA-G1、G2、-G3）。 尽管目前对于HLA-G抑制NK细胞活性功能研究的比较多，也发现了许多NK细胞抑制性受体，但是对于HLA-G究竟如何与NK细胞受体作用，以及受体识别后抑制信号的传递还有待于进一步的研究证实。为阐明HLA-G与NK细胞的识别机制以及HLA-G参与免疫耐受作用的分子机理，我们应用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中克隆包含HLA-G1完整阅读框的cDNA序列。在此基础上，PCR扩增编码HLA-G1胞外区片断，构建了pGEM-T-sHLA-G1克隆载体，进一步将其sHLA-G1亚克隆到表达载体pGEX4T2上，构建了sHLA-G1原核表达载体pGEX4T2-HLAG-G1，转化大肠杆菌DE3，经IPTG诱导表达出GST-sHLA-G1融合蛋白。SDS-PAGE显示融合蛋白分子量与期望值一致为56kD。Western blot显示融合蛋白能被HLA-G单克隆抗体87G识别。融合蛋白在原核大量表达始终形成包涵体，HLA-G胞外区本身就含有两二硫键，这为蛋白质正确折叠造成很大困难。因此，对表达产物形成的包涵体进行了溶解、洗涤、复性等一系列过程，摸索出融合蛋白GST/sHLA-G复性最适的过程参数，提高复性率。用亲和层析方法纯化融合蛋白GST/sHLA-G1，⁵¹Gr释放实验证实了可溶性HLA-G1具有体外抑制NK细胞杀伤活性的作用，也说明我们通过原核表达首次获得具有生物学活性的sHLA-G1融和蛋白，为进一步研究HLA-G与NK细胞受体相互作用的分子机制奠定了基础。