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目的 1.探讨加减驻景方含药血清对二氯化钴(Co Cl2)诱导后人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增殖的影响。2.探讨加减驻景方含药血清对二氯化钴(Co Cl2)诱导后人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)中血管内皮生长因子(VEGF)及低氧诱导因子-1a(HIF-la)蛋白表达的影响,初步探讨加减驻景方抑制脉络膜新生血管形成的分子机制,为加减驻景方治疗脉络膜新生血管提供实验依据。方法 1.体外培养ARPE-19细胞,取对数生长良好的细胞用于实验,分为正常组,缺氧模型组,缺氧后药物干预组,并设立不同浓度及时间组。2.CCK-8法检测不同时间、不同浓度药物(含药血清、空白血清、康柏西普)各组对细胞毒性的影响。3.建立二氯化钴(Co Cl2)缺氧细胞模型。4.CCK-8法检测Co Cl2诱导后不同时间、不同浓度药物(含药血清、空白血清、康柏西普)作用下各组细胞增殖的影响。5.酶联免疫吸附试验(ELISA)观察Co Cl2诱导后不同时间、不同浓度药物(含药血清、空白血清、康柏西普)作用下各组细胞上清液中VEGF、HIF-la表达的影响。6.免疫印迹法(Western Blot)观察Co Cl2诱导后不同时间、不同浓度药物(含药血清、空白血清、康柏西普)作用下各组细胞中VEGF、HIF-la蛋白表达的影响。结果 1、不同浓度加减驻景方含药血清、空白血清和20μg/m L康柏西普组对ARPE-19细胞无毒性反应,与正常组比较无统计学意义(P>0.05);40μg/m L及以上康柏西普浓度对ARPE-19细胞产生毒性反应,与正常组比较(P<0.05)。2、Co Cl2组(100、200μmol/L)可促进细胞的增殖、400μmol/L的Co Cl2组细胞呈现抑制状态,均与正常组比较,差别具有统计学意义(p<0.05)。3、缺氧模型组与正常组比较,细胞的增殖、VEGF及HIF-1α的表达高于正常组,差别具有统计学意义(p<0.05);缺氧后药物干预组(除空白血清、5%加减驻景方、5μg/ml康柏西普组)与模型组比较,细胞的增殖、VEGF及HIF-1α的表达低于模型组,差别具有统计学意义(p<0.05)。结论 1、缺氧损伤后可诱导ARPE-19细胞的增殖及VEGF、HIF-la蛋白的表达增加;2、加减驻景方含药血清对缺氧损伤后ARPE-19细胞的增殖及VEGF、HIF-la蛋白的表达有抑制作用;3、加减驻景方含药血清可能是通过改善缺血缺氧状态,抑制了细胞因子的分泌,达到治疗脉络膜新生血管的目的。