帕金森病(PD)是锥体外系统的进行性神经变性疾病，其发病机制有多种学说。近几年的科学研究从帕金森病黑质多巴胺神经元选择性受损出发，结合大量已进行的帕金森病发病机理研究，发现正是黑质纹状体系统自身的多巴胺递质囊泡转运受到抑制而触发的多巴胺内源性毒性在帕金森病发病机制中起了关键的作用。多巴胺是易氧化的儿茶酚胺类物质的一种，它可发生酶促和非酶氧化，它的代谢终产物和代谢过程中产生的自由基都可损伤细胞而导致细胞的死亡。单胺类囊泡转运体(VMAT)能够把包括多巴胺在内的单胺类等物质，从胞浆转运隐匿至神经细胞囊泡中而使得多巴胺在胞浆内浓度很低，不足以产生毒性作用。本研究检测不同浓度多巴胺对大鼠嗜铬瘤细胞(PC12细胞)的毒性作用及加入VMAT特异性抑制剂利血平后的协同毒性作用，籍以探讨VMAT功能抑制触发的多巴胺内源性毒性在帕金森病发病机制中所起的作用，以阐明一个较为完善而合理地解释帕金森病特异性、进行性病理特点的发病机制。 本研究分为两部分：1，培养PC12细胞，进入对数生长期后，加入不同浓度的多巴胺及特定浓度的利血平，培养48小时后应用MTT法观察多巴胺对PC12细胞生存状况的影 油京卜村人学灿1：学位沦义响。2，对加入多巴胺及利血平处理过的队12 细胞借助流式细胞仪，进行 Annexin V斗ITC 染料双染检测，以探究药物处理过的 队12 细胞的死亡方式；对加入多巴胺及利血平处理过的Pm 2 细胞反复冻融使细月破坏，然后检坝兰月 内脂质过氧化物丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶J）；对加入药物处理的PC12 细胞同时加入抗氧化作用的二硫苏糖醇 （DTT人 还原型谷眈甘肽问SIi）及中药脉冲1 号，观察它们对PC12细胞的保护作用。 结果：1，多巴胺对 PC 细胞有毒性作用，毒性作用与多巴胺浓度呈明显剂量反应关系。单独作用的利血平对队12细胞无毒性作用，但与多巴胺一起对多巴胺有协同毒性作用。2，多巴胺及利血平对 PCIZ细胞的毒性作用与 MDA增加有关，SOD增加间接反应了多巴胺的氧化代谢毒性。多巴胺及利血平作用过的队12细胞以凋亡、先凋亡后继发性坏死、及单纯坏死三种方式死亡，抗氧化剂对药物处埋的 nu 细胞有保护作用。 帕金森病最基本的病理改变是黑质多巴胺神经元减少可达 6 0卡 0儿 这种减少是细胞坏死还是凋亡，目前尚无定论。PCu圭月是儿茶酚胺细月株，因其具有与多巴胺神经元相｛的结构与功能而作为研究神经细胞毒理的有力工具卜’。利血平是 VMAT特异且高效的抑制剂“‘。本研究表明多巴胺对K 12细胞有毒性作用，且这种毒性作用随多巴胺浓度的增加而增加。单独作用的利血平对盯12 细胞无毒性作用，但利血平与多巴胺共同作用可明显增加多巴胺的毒性作用，这支持VMAT具有隐 匿胞内毒性物质以保护神经细胞的功能n‘。PC12细胞因缺乏苯丙氨酸羟化酶，不能以细胞培养液中的苯丙氨酸作为合成多巴胺的起始前体而难以自身合成多巴胺，因此 内人山村人学叩Z；学什论义单独作用的利血平，即使高达1600nnlol八对PCu兰月 亦无毒性作用，但极低浓度就可使多巴胺的毒性作用明显增强。通过流式细胞仪染料双染实验分析，证明多巴胺内源性毒性主要通过凋亡和先凋亡后继发性坏死的环节诱发KIZ 细胞的死亡。在正常情况下，作为神经递质的多巴胺转变为内源性毒性物质，是由于对细胞具有保护作用的VMAT功能受到了抑制，使得易氧化的多巴胺在胞浆内通过酶氧化和非酶氧化产生了自由基卜’，后者能攻击细胞膜中的多不饱和脂肪酸引起脂质过氧化作用形成脂质过氧化物，而抗氧化剂可以保护多巴胺对PQ 2细胞的毒性作用。