【摘 要】
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宫颈癌在全球女性中发病率及死亡率较高,约三分之二患者被诊断为局部晚期宫颈癌,预后较差,因此寻找新的宫颈癌预后标志物至关重要。目的:通过GEO和TCGA数据库筛选宫颈癌差异表达基因获得lncRNA UNC5B-AS1,并进一步探究lncRNA UNC5B-AS1对宫颈癌增殖及上皮间质转化能力的影响。方法:宫颈癌相关数据集GSE63514下载自GEO数据库,同时下载TCGA数据库中宫颈癌患者相关信息,
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宫颈癌在全球女性中发病率及死亡率较高,约三分之二患者被诊断为局部晚期宫颈癌,预后较差,因此寻找新的宫颈癌预后标志物至关重要。目的:通过GEO和TCGA数据库筛选宫颈癌差异表达基因获得lncRNA UNC5B-AS1,并进一步探究lncRNA UNC5B-AS1对宫颈癌增殖及上皮间质转化能力的影响。方法:宫颈癌相关数据集GSE63514下载自GEO数据库,同时下载TCGA数据库中宫颈癌患者相关信息,通过生物信息学分析筛选获得目的lncRNA。采用q RT-PCR验证19例宫颈癌组织和23例正常宫颈组织的m RNA表达水平,同时验证宫颈癌细胞株Ca Ski、He La及Si Ha的m RNA表达水平,最终筛选得到lncRNA UNC5B-AS1。使用GEPIA网站验证lncRNA UNC5B-AS1在宫颈癌组织中的差异表达。构建lncRNA UNC5B-AS1敲降模型（采用宫颈癌细胞系He La细胞、Ca Ski细胞）,构建lncRNA UNC5B-AS1过表达模型（采用宫颈癌细胞系Si Ha细胞、He La细胞）。通过CCK-8实验验证lncRNA UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖活力的影响,同时平板克隆实验用于验证lncRNA UNC5B-AS1对宫颈癌细胞集落形成能力的影响,采用Ed U实验验证lncRNA UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖水平的影响,Transwell迁移及侵袭实验用于验证lncRNA UNC5B-AS1对宫颈癌细胞的迁移及侵袭的影响。采用Western blotting检测上皮间质转化相关基因E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin的蛋白表达水平。通过转录组测序获得lncRNA UNC5B-AS1调控的信号通路,并通过q RT-PCR及Western blotting检测信号通路相关蛋白表达水平。结果:对GEO数据库宫颈癌相关数据集GSE63514和TCGA转录组数据库进行差异表达lncRNA筛选,取交集获得15个差异表达lncRNA。采用q RT-PCR验证lncRNA UNC5B-AS1在宫颈癌组织中m RNA表达水平,其表达量明显高于正常宫颈组织,GEPIA网站再次验证了q RT-PCR结果。CCK-8结果提示沉默lncRNA UNC5B-AS1抑制宫颈癌细胞活力,过表达lncRNA UNC5B-AS1提高宫颈癌细胞活力。同时平板克隆实验提示沉默lncRNA UNC5B-AS1可明显抑制宫颈癌细胞集落形成能力,而过表达lncRNA UNC5B-AS1后宫颈癌细胞集落形成能力明显增强。Ed U实验证实干扰lncRNA UNC5B-AS1可抑制宫颈癌细胞增殖,而过表达lncRNA UNC5B-AS1则促进宫颈癌细胞增殖能力。Transwell迁移及侵袭实验提示,沉默lncRNA UNC5B-AS1使宫颈癌细胞迁移、侵袭能力受到抑制,而过表达lncRNA UNC5B-AS1则促进宫颈癌细胞迁移、侵袭能力。同时,Western blotting结果提示lncRNA UNC5B-AS1能调控宫颈癌细胞上皮间质转化。转录组测序结果提示lncRNA UNC5B-AS1能调控Toll样受体信号通路;q RT-PCR及Western blotting结果提示,对比阴性对照组,沉默及过表达lncRNA UNC5B-AS1均显著影响富集到Toll样受体信号通路相关基因IL6、TICAM2的表达水平（P＜0.05）。结论:LncRNA UNC5B-AS1在宫颈癌中高表达,高表达lncRNA UNC5B-AS1通过增强Toll样受体信号通路活性,从而促进宫颈癌细胞增殖及上皮间质转化能力。
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