蜱是一种重要的体表吸血寄生虫,也是仅次于蚊的第二大病原传播媒介,传播多种人、畜疾病,给人类健康和畜牧业带来极大的危害。近年来,蜱和蜱传病原的分子生物学研究都取得了很大进展,但对于蜱与病原二者间相互作用的研究还很缺乏。因此,了解病原与媒介蜱相互作用的分子机制,对于寻找蜱及蜱传病的防控新策略具有重要意义。　　 长角血蜱在我国南北方均广泛分布,是动物和人的多种蜱传病的媒介,其功能基因组学研究已取得不少进展,研究报道已经先后分离鉴定了多个重要功能分子,包括半胱氨酸蛋白酶抑制剂分子HLcyst-1、HLcyst-2、HLcyst-3,卵泡抑素相关蛋白FRP,凝血酶抑制剂Hemalin和肠道抑菌肽HLgut-defensin。但这些重要的蜱体内功能分子与病原感染有无相互作用目前还不清楚。本研究选用伯氏疏螺旋体、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及巴贝斯虫的表面抗原分别人工注射到长角血蜱体内后,于感染后不同时间点提取蜱的总RNA,反转录成cDNA,采用实时荧光定量PCR技术,对这些功能基因的转录影响进行了研究,初步探讨了病原体与媒介蜱的相互作用关系。　　 (1)将不同浓度梯度的伯氏疏螺旋体显微注射到长角血蜱体内,于感染后1d、4d、7d、10d提取蜱的总RNA,反转录成cDNA,实时荧光定量PCR检测蜱的HLcyst-1、Hleyst-3、FRP和Hemalin4个功能基因在转录水平上的变化。结果显示,伯氏疏螺旋体感染对这4个功能基因的转录均产生了显著影响,且存在时间和剂量相关性,感染后4d显著诱导了长角血蜱Hlcyst-1基因的表达,抑制了Hemalin基因的表达。　　 (2)选取了革兰氏阴性和革兰氏阳性代表菌株:大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,分别显微注射感染长角血蜱,于感染后1h、3h、6h、9h、12h、24h提取蜱的总RNA,反转录成eDNA后,实时荧光定量PCR检测蜱的HLcyst-1,HLcyst-2,HLcyst-3和HLgut-defensin4个功能基因转录水平的变化。结果显示,大肠杆菌感染蜱后,Hleyst-3表达量显著增加,感染9h后达到了最大值,为PBS对照组的7.6倍,感染9h后HLgut-defensin表达量也有显著的增加趋势;金黄色葡萄球菌感染蜱9h后HLgut-defensin表达量显著增加。　　 (3)将携带有巴贝斯虫表面抗原P50基因的重组质粒B.git P50/PGEX-4T-3在原核表达系统中表达并纯化出来,得到的重组蛋白显微注射到长角血蜱体内,于感染后1h、3h、6h、9h、12h、24h提取蜱的总RNA,反转录成cDNA后,实时荧光定量PCR检测蜱的HLcyst-1,Hlcyst-2,Hlcyst-3和Hlgut-defensin4个功能基因转录水平的变化。结果显示,P50重组蛋白对蜱的这4个功能基因产生的影响不明显。　　 本研究初步探讨了病原体感染蜱后对蜱的4个功能基因表达产生的影响,发现对蜱的免疫相关基因影响比较大,这为筛选具有良好免疫原性的功能基因提供了有利依据,为进一步探索病原与媒介硬蜱相互作用的分子机制奠定了基础。