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药物性肝损伤（drug-induced liver injury,DILI）是一种常见的药物不良反应,而且有逐年增多的趋势。全球对DILI的关注度也日益提高。药物性肝损伤可通过“肝-肠循环系统”以及“肝脏-肠道微生态轴”引起肠道菌群失调,在肝脏和肠道之间形成恶性循环,加重肝功能恶化。曲美他嗪（Trimetazidine,TMZ）通过改善心肌细胞的能量代谢在冠心病的治疗中广泛应用,其中也包括不少合并肝脏疾病的患者。本课题组前期的研究发现曲美他嗪（Trimetazidine,TMZ）可以通过改善肝细胞脂肪酸的代谢来改善肝细胞的供能,有效缓解肝细胞的氧化应激反应。但是曲美他嗪对急性药物性肝损伤时肠道微生态的影响目前鲜有研究。因此,本课题首先通过观察急性药物性肝损伤患者应用TMZ治疗前后的肝功能及疗效的变化,由此延伸出对TMZ保护急性药物性肝损伤作用机制的探索,为曲美他嗪的临床应用提供实验依据。目的1.观察曲美他嗪治疗急性药物性肝损伤的临床疗效。2.构建急性化学性肝损伤大鼠模型,观察曲美他嗪干预后肝损伤大鼠的生化指标,肝脏细胞病理特征及肠道微生态菌群结构的变化,探索曲美他嗪对急性化学性肝损伤的作用机制。方法临床研究1.回顾性分析:将DILI患者分为常规药物治疗组和TMZ联合常规药物治疗组。比较两组患者治疗前后临床疗效及血清谷丙转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（AST）,碱性磷酸酶（ALP）和总胆红素（TBIL）的水平。2.设计一项单中心,前瞻性研究:采用随机数字表法将DILI患者分为常规治疗组和曲美他嗪治疗组。比较两组患者治疗前后临床疗效及血清谷丙转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（AST）,碱性磷酸酶（ALP）和总胆红素（TBIL）的水平。动物实验1.TMZ预防作用的实验研究:40只雄性SD大鼠随机均分为对照组（pre-Ctrl）,模型组（pre-Model）,TMZ 高、低剂量组（pre-TMZ-H、pre-TMZ-L）。TMZ高、低剂量组分别给予不同浓度TMZ灌胃预处理1周。除pre-Ctrl组外,其余三组予腹腔注射50%的CCl4橄榄油溶液建立大鼠急性肝损伤动物模型。2.TMZ治疗作用的实验研究:40只雄性SD大鼠随机均分为对照组（Ctrl）,模型组（Model）,TMZ高、低剂量（TMZ-H、TMZ-L）。除Ctrl组外,其余三组予腹腔注射50%的CCl4橄榄油溶液建立大鼠急性肝损伤动物模型。建模后分别按照TMZ-H高、低浓度给予大鼠TMZ灌胃,持续1周。3.以上两部分动物实验分别检验各组大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（AST）,碱性磷酸酶（ALP）,总胆红素（TBIL）的水平。观察各组肝组织病理学特征。取各组回盲部粪便样本进行菌群16S rDNA的二代测序分析。结果临床研究1.回顾性分析:TMZ联合常规治疗组治疗后的显效率显著高于常规治疗组（P＜0.05）。两组患者血清ALT,AST,ALP及TBIL的水平均较各组治疗前显著降低（P＜0.05）。治疗后TMZ联合常规治疗组较常规药物治疗组的血清ALT,AST,ALP及TBIL的水平下降更加明显（P＜0.05）。2.前瞻性分析:TMZ治疗组治疗后的显效率显著高于常规治疗组（P＜0.05）。两组患者血清ALT,AST,ALP及TBIL的水平分别较各组治疗前显著降低（P＜0.05）。治疗后TMZ治疗组较常规药物治疗组的血清ALT,AST,ALP及TBIL的水平下降更加明显（P＜0.05）。动物实验1.TMZ预防作用的实验研究血清肝功能指标测定:与pre-Ctrl组比较,pre-Model组的大鼠血清ALT,AST,ALP,TBIL水平均显著升高（P＜0.05）,说明急性肝损伤大鼠模型建立成功。与 pre-Model 组比较,pre-TMZ-H 组及 pre-TMZ-L 组大鼠血清 ALT,AST,ALP,TBIL的水平显著降低（P＜0.05）。肝组织HE染色:pre-Model组大鼠肝小叶中央区均可见灶性损伤,肝细胞条索排列紊乱及脂肪变性,并伴有大量炎性细胞侵润。pre-TMZ-H组及pre-TMZ-L组大鼠肝组织结构趋向完整,未见显著大片状坏死。肝细胞条索排列较整齐,肝小叶局部有少量肝细胞变性坏死,炎性细胞浸润减少。粪便肠道菌群16S rDNA的二代测序分析:Alpha多样性分析:pre-TMZ-H组及pre-TMZ-L组的肠道菌群丰度及多样性均较pre-Model组升高并较pre-Ctrl组降低（P＜0.05）。Beta多样性分析:pre-TMZ-H组及pre-TMZ-L组肠道微生态物种的相似度较pre-Ctrl组及pre-Model组分别具有一定程度的变化。在门水平的丰度分布,各组样本的优势菌门均为厚壁菌门（Firmicutes）;拟杆菌门（Bacteroidetes）以及变形菌门（Proteobacteria）。与 pre-Model 组比较,pre-TMZ-H组及pre-TMZ-L组肠道微生态样本中厚壁菌门丰度增多,同时拟杆菌门丰度减少（P＜0.05）。LEfSe:pre-Ctrl组有33个关键菌落发生显著变化,多属于厚壁菌门。pre-Model组有7个关键菌落发生显著变化,多属于放线菌门和变形菌门。P-TMZ-H组有22个关键菌落发生显著变化多属于厚壁菌门。P-TMZ-L组有32个关键菌落发生显著变化,多属于厚壁菌门。2.TMZ治疗作用的实验研究血清肝功能指标测定:与Ctrl组比较,Model组的大鼠血清ALT,AST,ALP,TBIL水平均升高（P＜0.05）。与Model组比较,TMZ-H组及TMZ-L组大鼠血清ALT,AST,ALP,TBIL的水平显著降低（P＜0.05）。肝组织HE染色:Model组大鼠肝小叶中央区可见肝细胞条索排列紊乱及脂肪变性,并伴有大量炎性细胞侵润。TMZ-H组及TMZ-L组大鼠肝组织结构趋向完整,未见显著大片状坏死。肝细胞条索排列较整齐,肝小叶局部有少量肝细胞变性坏死,炎性细胞浸润减少。粪便肠道菌群16S rDNA的二代测序分析:Alpha多样性分析发现:TMZ-H组及TMZ-L组的肠道菌群丰度及多样性均较较Model组升高并较Ctrl组降低（P＜0.05）。Beta多样性分析:TMZ-H组及TMZ-L组肠道微生态物种的相似度较Model组具有一定程度的变化。在门水平的丰度分布,各组样本的优势菌门均为厚壁菌门（Firmicutes）;拟杆菌门（Bacteroidetes）;疣状菌门（verrucomicrobiae）以及变形菌门（Proteobacteria）。与Model组比较,TMZ-H组及TMZ-L组肠道微生态样本中厚壁菌门丰度增多,拟杆菌门丰度减少（P＜0.05）。LEfSe:分析可发现Ctrl组有28个关键菌落发生显著变化,多属于厚壁菌门。Model组有30个关键菌落发生显著变化,多属于拟杆菌门。TMZ-H组有16个关键菌落发生显著变化,多属于厚壁菌门。TMZ-L组有38个关键菌落发生显著变化,多属于疣微菌门和厚壁菌门。结论1.曲美他嗪可改善急性药物性肝损伤的肝脏功能,可能作为急性药物性肝损伤的辅助治疗药物,值得临床推广应用。2.曲美他嗪为肠道菌群提供能量储备,减轻损肝药物引起的肠道微生态紊乱,进而对急性药物性肝损伤起到一定的预防作用;3.曲美他嗪可以改善肠道微生态的紊乱,经“肝-肠循环”及“肠道微生态-肝脏轴”的正反馈作用,促进药物性肝损伤的肝细胞的修复,进而改善肝脏功能。